2015-06-03
org.kosen.entty.User@c86791d
고관영(proko34)
- 3
HPLC IEC로 단백질 분석을 하는데요.
한 단백질의 표준샘플로 검량선을 그리는데,
어느날 부터 peak가 나뉘어 나와서 세척을 하고자
방향을 바꿔서도 하고 했는데,
다시 정방향으로 돌리니 압이 걸립니다.......ㅠㅠ
inlet쪽에 contamination이 쌓인 것 같은데요....;;
다른 세척법이나 해결방법 , 노하우가 있으시면
알려주시면 정말 감사하겠습니다.
IEC컬러이 아니어도 RP컬럼도 같은 컨셉일 거 같은데요...
부탁드립니다.ㅠ
한 단백질의 표준샘플로 검량선을 그리는데,
어느날 부터 peak가 나뉘어 나와서 세척을 하고자
방향을 바꿔서도 하고 했는데,
다시 정방향으로 돌리니 압이 걸립니다.......ㅠㅠ
inlet쪽에 contamination이 쌓인 것 같은데요....;;
다른 세척법이나 해결방법 , 노하우가 있으시면
알려주시면 정말 감사하겠습니다.
IEC컬러이 아니어도 RP컬럼도 같은 컨셉일 거 같은데요...
부탁드립니다.ㅠ
- hplc
- column
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답변 3
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답변
이경인님의 답변
2015-06-04- 2
첨부된 파일은 일반적이 IEC column의 세척방법입니다.
IEC 자체가 원래 column 수명이 다른 종류의 column에 비해 짧은 편입니다.
그리고 세척법도 상당히 다릅니다.
maker에 따라서는 순수를 장시간 사용하는 것을 권장하지 않는 경우도 있으니 data sheet를 확인해 보시기 바랍니다.
특히 단백질 쪽이라면, 표준품만 분석해도 이런 현상이 종종 발생합니다.
이동상 신경써서 관리해주셔야 하구요, 눈에 보이지 않지만 미생물 오염도 주의깊게 살피셔야 합니다.
세척을 충분히(하루 이상) 수행하여도 별다른 변화가 없으시다면 스트레스라도 줄이시도록 교환을 고려하십시오.
혹시나 column이외에 별도의 filter part(이동상 tubing이나 pump 전후 line)가 부착되어 있다면 함께 점검해 보시기 바랍니다. -
답변
이상후님의 답변
2015-06-05- 2
압이 걸리는 원인이 염이 축적되서 일 수도 있고, 단백질 같은 생체물질이 축적되서 일수도 있는데, 단백질이나 기타 생체물질에 의한 것이라면 일반적인 IEC 컬럼 세척법에 의해서 거의 세척이 됩니다. 하지만 일반적인 세척법에 의해서도 압이 걸린다면 염이 원인일 가능성이 높습니다.
만약 염이나 산과 같은 버퍼를 장시간 사용하여 염에 의한 문제일 경우에는
메탄올 : 20 mmol/l 인산버퍼= 50 : 50 또는 메탄올 : 물 = 50 : 50 조건으로 세척 권합니다.
이런 방법등을 통해서도 압이 정상으로 돌아오지 않으면 과감하게 버리고 새로운 컬럼을 사용하는 것이 제일 좋은 방법입니다.
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답변
김동현님의 답변
2015-06-09- 2
컬럼의 방향을 바꾸어서 세척하는 것은 컬럼베드에 큰 영향을 주어서 되도록이면 하지 않는 것이 좋습니다. 수명이 거의 다되어가는 컬럼의 마지막 세척방법이기도 하구요. 앞서 말씀하신 분들의 방법을 시도해보셔도 압이 떨어지지 않으면 새로운 컬럼을 구입하시는 것이 좋을 듯 합니다.