2015-06-16
org.kosen.entty.User@1f71f420
배소현(baesohyun)
- 3
Radioisotope labeling 대신 DIG-labelling으로 Southern blot detection을 시도하고 있습니다.
Radioisotope labeling detection 때에는 10 ug genomic DNA만 사용해도 detection이 잘 되었는데,
DIG labelling으로는 잘 안 되네요...혹시 이 방법으로 detection해 보신 분이 있다면 조언 바랍니다.
Radioisotope labeling detection 때에는 10 ug genomic DNA만 사용해도 detection이 잘 되었는데,
DIG labelling으로는 잘 안 되네요...혹시 이 방법으로 detection해 보신 분이 있다면 조언 바랍니다.
- Southern blot
- detection
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답변 3
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답변
황규찬님의 답변
2015-06-17- 2
1) P32보다 DIG방법은 그 감도가 상당히 낮습니다.
2) 따라서, 감도를 높이기 위해서는 아래와 같이 몇몇 사항을 고려해야 합니다.
3) 첫번째, gDNA양을 높여야 합니다. 기존 10ug보다 30ug-100ug를 사용해야 합니다.
4) 두번째, gDNA를 많이 사용하는것도 중요하지만, 그 보다 더 중요한 것은 RE(제한효소)로 가능한 100% 제한할 수 있어야 합니다. 그렇지 못하면 많이 사용하는 의미가 없어집니다.
5) 세번째, blotting할때 가능한 gel로 부터 거의 80%이상 membrane에 전달되어야 합니다.
5) 마지막으로 , Dig-Probe를 잘 만들어야 합니다. 가능한 좀더 길게 dig가 많이 삽입될 수 있도록 해야 하고 몇 종류로 만들어 가장 감도가 높은 프로브를 사용하셔야 합니다.
수 -
답변
황규찬님의 답변
2015-06-17- 1
1) P32보다 DIG방법은 그 감도가 상당히 낮습니다.
2) 따라서, 감도를 높이기 위해서는 아래와 같이 몇몇 사항을 고려해야 합니다.
3) 첫번째, gDNA양을 높여야 합니다. 기존 10ug보다 30ug-100ug를 사용해야 합니다.
4) 두번째, gDNA를 많이 사용하는것도 중요하지만, 그 보다 더 중요한 것은 RE(제한효소)로 가능한 100% 제한할 수 있어야 합니다. 그렇지 못하면 많이 사용하는 의미가 없어집니다.
5) 세번째, blotting할때 가능한 gel로 부터 거의 80%이상 membrane에 전달되어야 합니다.
5) 마지막으로 , Dig-Probe를 잘 만들어야 합니다. 가능한 좀더 길게 dig가 많이 삽입될 수 있도록 해야 하고 몇 종류로 만들어 가장 감도가 높은 프로브를 사용하셔야 합니다.
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답변
김제현님의 답변
2015-07-11- 1
몇가지만 첨언 합니다.
1) 상기한대로 gDNA양 을 높여보세요
2) probe로 쓰는 DNA를 LAbeling 하지말고 낮은 농도로 희석 하여 여러농도로 DOT blot 하여 같이 Hybridization 해보세요. Dot에서 probe의 감도를 알수 있을겁니다.