지식나눔

ELISA 결과가 달라질까요?

ELISA multiplex kit로 혈액 중 여러 가지 호르몬 농도를 동시에 측정하고자 합니다.

동일 환자에서 8개의 호르몬을 동시에 측정하는데,
이 중에 2개의 호르몬은 채혈후 호르몬분해를 방지하기 위해 protein inhibitor 처리를 필요로합니다.
protein inhibitor 처리를 요하는 호르몬을 다른 호르몬들과 같은 well에서 ELISA 시행할 경우,
protein inhibitor volume 때문에, 호르몬 농도가 dilution 되지는 않나요? 
dilution 된다면 protein inhibitor 처리를 필요로 하는 호르몬2개를 나머지 호르몬들과 따로 분리해서 측정해야하는지 궁금합니다.
 
  • ELISA
  • 호르몬
  • 전처리
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답변 3
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    김헌성님의 답변

    안녕하세요 
    제가 생각으로는 따로 protein inhibitor를 처리하여 well에 넣는 다면 희석회는 것이 맞는데 well에  protein inhibitor를 직접 넣으면 그 안에 protein(호르몬)양을 변하지 않기 때문에 상관업습니다.
    그리고 되도록이면 multiplex kit보다는 다로 측정할 수 있는 kit를 사용하는 것이 더 좋을 것 같습니다. 물론 비용이 많이 들긴 하지만요
    안녕하세요 
    제가 생각으로는 따로 protein inhibitor를 처리하여 well에 넣는 다면 희석회는 것이 맞는데 well에  protein inhibitor를 직접 넣으면 그 안에 protein(호르몬)양을 변하지 않기 때문에 상관업습니다.
    그리고 되도록이면 multiplex kit보다는 다로 측정할 수 있는 kit를 사용하는 것이 더 좋을 것 같습니다. 물론 비용이 많이 들긴 하지만요
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    변경필님의 답변

    정확한 혈액내 호르몬 정량을 위해서는
    (혈액내 특정호르몬의 변화 경향 확인이 아닌 정량이 중요하는 경우)
    채혈 후 혈액에 protein inhibitor을 즉시 처리하는 것을 권장드립니다.
    이때 처리하는 protein inhibitor의 량만큼 확인하고자하는 호르몬의 량이 희석되기 때문에, 채혈 후 특정호르몬의 반감기, 시험 준비시간 등을 고려하여 protein inhibitor 처리량을 결정하셔야 합니다.
    그리고 최종 농도 계산시에는 채혈시 사용된 항응고제, protein inhibitor 등의 부피도 고려하여 환산 하시면 될 것 같습니다.
    정확한 혈액내 호르몬 정량을 위해서는
    (혈액내 특정호르몬의 변화 경향 확인이 아닌 정량이 중요하는 경우)
    채혈 후 혈액에 protein inhibitor을 즉시 처리하는 것을 권장드립니다.
    이때 처리하는 protein inhibitor의 량만큼 확인하고자하는 호르몬의 량이 희석되기 때문에, 채혈 후 특정호르몬의 반감기, 시험 준비시간 등을 고려하여 protein inhibitor 처리량을 결정하셔야 합니다.
    그리고 최종 농도 계산시에는 채혈시 사용된 항응고제, protein inhibitor 등의 부피도 고려하여 환산 하시면 될 것 같습니다.
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    심우영님의 답변

    일단 농도 계산에 영향을 끼칠정도의 inhibitor의 부피가 들어가지는 않을 것으로 판단됩니다.
    Dilution의 가능성이 걱정이 된다면 전체를 같은 조건으로 만들어서 측정하면 됩니다.
    ELISA multiplex를 이용하게 되면 Standard curve를 그려서 넣겠죠.
    Standard에도 같은 부피 농도의 inhibitor를 넣고 측정하게 된다면 적어도 넣어준 부피에 대한 dilution 조건은 같아지게 되니 원래 수치에 근접한 값을 얻을 수 있을 겁니다.
    일단 농도 계산에 영향을 끼칠정도의 inhibitor의 부피가 들어가지는 않을 것으로 판단됩니다.
    Dilution의 가능성이 걱정이 된다면 전체를 같은 조건으로 만들어서 측정하면 됩니다.
    ELISA multiplex를 이용하게 되면 Standard curve를 그려서 넣겠죠.
    Standard에도 같은 부피 농도의 inhibitor를 넣고 측정하게 된다면 적어도 넣어준 부피에 대한 dilution 조건은 같아지게 되니 원래 수치에 근접한 값을 얻을 수 있을 겁니다.
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