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Fading 또는 bleaching은 형광현미경 실험의 문제점 중의 하나입니다. 그러므로 Mounting medium에 antifade agent를 첨가하면 fading의 속도를 감소시키켜 장시간 관찰이 가능할 수 있습니다. 일반적으로, mounting medium은 glycerol-based medium으로 buffer, antifade agent를 포함합니다(specimen의 장기 보관을 위해 polyvinyl alcohol mounting medium을 사용하기도 합니다). 그래서, Glycerol-based anti-fade mounting medium에 대해서 잠시 말씀드리면(회사에서 공급되는 시약의 정확한 조성은 잘 모르겠습니다), H20에 의해 anti-fade 효과가 감소하기 때문에 물을 잘 없애 주는 것이 중요하고 Triton X-100 등의 detergent는 anti-fade solution을 오히려 quenching solution으로 만들어 버리기 때문에 detergent를 mounting하기 전에 완전히 없애 주는게 중요하죠... 또한 조성 중에 p-phenylenediamine이 들어 있는데 이는 빛에 의해서 산화가 잘 되고 그러면 fluorescent product로 바뀌는데 nuclei에 비특이적으로 결합하는 경향이 있어 background로 작용할 수도 있습니다. 일반적으로, 회사에서 파는 anti-fade agent들의 경우 회사 manual에 따라 하시면 크게 문제는 없을 겁니다. 여러시약을 동시에 비교한 적이 없지만 molecular probes에서 나온 제품을 큰 문제 없이 저는 사용했습니다. molecular probes에서 여러 종류의 antifade agent가 나오는데 어떤 형광으로 실험을 했는지에 따라서 조금씩 antifade effect가 다릅니다. 그러니 혹시 보셨는지 모르겠지만 molecular probes에서 나온 자료를 하나 첨부하겠습니다. 좋은 주말 보내세요... >안녕하세요. >저는 intracellular ion-sensitive fluorescence probe를 cell에 loading하여 intracellular 수준의 probe변화를 관찰하고자 합니다. >기초 실험을 몇번 하였는데 문제가 되는것은 >형광현미경 관찰하는 동안 fluorescence가 저절로 quenching되는 것입니다. 실험 목적이 treatments에 의한 fluorescence의 quenching인데 자연적인 quenching인지 treatments에 의한 quenching인지 알 수 없더군요. > >그래서 anti-fade reagent를 사용하려 하는데, 제가 찾아본 결과 sigma에서의 DABPI와 molecular probe에서 나온 Gold antifade reagent를 보았습니다. 어떤것을 사용하는 것이 더 유용할까요? >혹은 좀더 안정하고 좋은 다른 reagent가 있나요? > >그리고 fluorescence를 관찰하는데 또다른 좋은 방법들이 있나요? > >전문가 여러분의 많은 도움 부탁드립니다. > >좋은 하루 되세요^^ > >