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Luminol을 이용한 ROS 측정방법

2005-06-17 org.kosen.entty.User@5d703381 지희준(ivf129)
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혈액이나 세포배양 후 conditioned-medium등에서 ROS를 측정하고자 논문을 참고로하여 Luminol을 이용하여 측정하고자 합니다. 가지고 있는 luminometer를 이용해서 측정하려 하는데 쉽지가 않습니다. luminol농도는 5mM-DMSO solution으로 만들어 이중에서 10ul를 샘플 400ul와 혼합하여 ROS값을 측정하였습니다. 원하는 값이 제대로 나오지 않아 horseradish peroxidase도 함께 첨가하여 측정하였지만 큰 차이가 없었습니다. Q1. 가지고 있는 luminometer가 문헌상의 기계와 다른데 문헌상에서 intergrated mode for 15min이라는 환경을 주어서 측정하였는데 이러한 모드기능이 없는 기계라 어떠한 방법으로 이러한 기능을 대신할 수 있는지? 화학적 반응을 위한 인큐베이션 15분으로 대신할 수 있는지 궁금합니다. Q2. 투명한 96well plate를 사용하였더니 전혀 reading 이 안되고 불투명한 검은색의 plate를 이용하였더니 일정하지는 않지만 reading값이 뜹니다. 투명한 plate가지고는 측정이 불가능한지요? Q3. 기계가 정확하게 ROS level을 측정하는지를 보려고 H2O2를 농도별로 dilution해서 측정하였는데 값이 변화가 없거나 농도에 비례한 값이 나타나지 않습니다. 무슨 이유일까요? 무엇인가 빠뜨린 점이 있거나 노하우를 알고 계신 분의 조언을 구합니다. 감사합니다.
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    이영환님의 답변

    2005-06-17
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    참고 바랍니다.
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    참고 바랍니다.
    등록된 댓글이 없습니다.
  • 답변

    전주홍님의 답변

    2005-06-17
    • 0

    첨부파일

    Microtiter plate assay에서 1) fluorescence assay용으로는 검은색을 2) colorimetric assay용으로는 투명 plate 3) luminescence assay용으로는 흰색을 사용합니다. white color는 light의 reflectivity를 높이기 위함인데 첨부 파일을 보시면 black과 white를 이용했을 때 signal 등에 대해서 참고하실 수 있습니다. 일단 plate 문제가 가장 클 가능성이 높을 것 같은데요...white plate로 바꾼 후에 측정하시면 singal to noise의 ratio는 해결 되지 않을까요... integrated mode에 대해서는 좀 더 확인 후에 답변을 드리도록 하겠습니다. 기억이 가물가물 거려서요... 좋은 결과 있으시길 기대합니다. >혈액이나 세포배양 후 conditioned-medium등에서 ROS를 측정하고자 논문을 참고로하여 Luminol을 이용하여 측정하고자 합니다. >가지고 있는 luminometer를 이용해서 측정하려 하는데 쉽지가 않습니다. >luminol농도는 5mM-DMSO solution으로 만들어 이중에서 10ul를 샘플 400ul와 혼합하여 ROS값을 측정하였습니다. >원하는 값이 제대로 나오지 않아 horseradish peroxidase도 함께 첨가하여 측정하였지만 큰 차이가 없었습니다. > >Q1. 가지고 있는 luminometer가 문헌상의 기계와 다른데 문헌상에서 intergrated mode for 15min이라는 환경을 주어서 측정하였는데 이러한 모드기능이 없는 기계라 어떠한 방법으로 이러한 기능을 대신할 수 있는지? 화학적 반응을 위한 인큐베이션 15분으로 대신할 수 있는지 궁금합니다. > >Q2. 투명한 96well plate를 사용하였더니 전혀 reading 이 안되고 불투명한 검은색의 plate를 이용하였더니 일정하지는 않지만 reading값이 뜹니다. 투명한 plate가지고는 측정이 불가능한지요? > >Q3. 기계가 정확하게 ROS level을 측정하는지를 보려고 H2O2를 농도별로 dilution해서 측정하였는데 값이 변화가 없거나 농도에 비례한 값이 나타나지 않습니다. 무슨 이유일까요? > >무엇인가 빠뜨린 점이 있거나 노하우를 알고 계신 분의 조언을 구합니다. > >감사합니다.
    답변수정
    Microtiter plate assay에서 1) fluorescence assay용으로는 검은색을 2) colorimetric assay용으로는 투명 plate 3) luminescence assay용으로는 흰색을 사용합니다. white color는 light의 reflectivity를 높이기 위함인데 첨부 파일을 보시면 black과 white를 이용했을 때 signal 등에 대해서 참고하실 수 있습니다. 일단 plate 문제가 가장 클 가능성이 높을 것 같은데요...white plate로 바꾼 후에 측정하시면 singal to noise의 ratio는 해결 되지 않을까요... integrated mode에 대해서는 좀 더 확인 후에 답변을 드리도록 하겠습니다. 기억이 가물가물 거려서요... 좋은 결과 있으시길 기대합니다. >혈액이나 세포배양 후 conditioned-medium등에서 ROS를 측정하고자 논문을 참고로하여 Luminol을 이용하여 측정하고자 합니다. >가지고 있는 luminometer를 이용해서 측정하려 하는데 쉽지가 않습니다. >luminol농도는 5mM-DMSO solution으로 만들어 이중에서 10ul를 샘플 400ul와 혼합하여 ROS값을 측정하였습니다. >원하는 값이 제대로 나오지 않아 horseradish peroxidase도 함께 첨가하여 측정하였지만 큰 차이가 없었습니다. > >Q1. 가지고 있는 luminometer가 문헌상의 기계와 다른데 문헌상에서 intergrated mode for 15min이라는 환경을 주어서 측정하였는데 이러한 모드기능이 없는 기계라 어떠한 방법으로 이러한 기능을 대신할 수 있는지? 화학적 반응을 위한 인큐베이션 15분으로 대신할 수 있는지 궁금합니다. > >Q2. 투명한 96well plate를 사용하였더니 전혀 reading 이 안되고 불투명한 검은색의 plate를 이용하였더니 일정하지는 않지만 reading값이 뜹니다. 투명한 plate가지고는 측정이 불가능한지요? > >Q3. 기계가 정확하게 ROS level을 측정하는지를 보려고 H2O2를 농도별로 dilution해서 측정하였는데 값이 변화가 없거나 농도에 비례한 값이 나타나지 않습니다. 무슨 이유일까요? > >무엇인가 빠뜨린 점이 있거나 노하우를 알고 계신 분의 조언을 구합니다. > >감사합니다.
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