2005-06-30
org.kosen.entty.User@2d11847b
김상우(doctor1)
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Rat pancreas의 RNA를 isolation 중입니다.
pancreas tissue를 trizol을 사용하여 isolation을 하였는데 모두 degredation되었습니다.
web상에 search해 본 결과 UltraClean ™ Tissue RNA Isolation Kit (MO Biolaboratories.Inc)제품이 있는데 사용해 보신분의 조언을 부탁드립니다.
혹시 다른 방법으로 isolation 할 수 있는 방법이 있으면 많은 조언 부탁드립니다.
- rna
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답변 2
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답변
전주홍님의 답변
2005-06-30- 0
직접적인 도움이 될 지는 모르겠습니다. 첨부파일은 ambion (www.ambion.com)에 나온 내용을 pdf file로 만들어 본 것입니다. 잘 아시다시피 Pancreas는 RNase 활성이 높기로 유명한 장기입니다. DNA work에 흔히 사용하는 RNase를 보면 pancreatic RNase라고 되어 있죠... 그렇기 때문에 rat을 sacrifice하고 난뒤에 속도감 있게 실험을 진행하는 것이 무엇보다도 중요하고 tissue freezing 했다면 cryogenic temperature에서 조직을 갈아서 rna를 extract하는 것이 rna degradation을 방지할 수 있습니다. 그렇지 않으면 tissue가 녹으면서 상당히 많은 rna가 깨지거든요... ambion report에도 이렇게 나와 있지만 제 경험상의 결과와도 일치 했었습니다. 좋은 결과 있으시길 바랍니다. >Rat pancreas의 RNA를 isolation 중입니다. >pancreas tissue를 trizol을 사용하여 isolation을 하였는데 모두 degredation되었습니다. > >web상에 search해 본 결과 UltraClean ™ Tissue RNA Isolation Kit (MO Biolaboratories.Inc)제품이 있는데 사용해 보신분의 조언을 부탁드립니다. >혹시 다른 방법으로 isolation 할 수 있는 방법이 있으면 많은 조언 부탁드립니다. -
답변
허광래님의 답변
2005-06-30- 0
pancreas는 RNase가 많아서 정말 mRNA 뽑기 힘듭니다. 여러가지 방법이 있겠지만 제 경험상 다음 방법을 추천합니다. 사실 저도 별 방법 다 써봤읍니다. 1)샘플 췌취 2) 액체 질소에 얼림 3) 막자 사발로 액체질소하에서 간다 4)Isothianate Guanidine을 넣고 원심분리 한다 (Molecular Cloning책에 잘 나와있음; 이때 비중이 높아서 울트라 돌릴때 조심해야 함) 5) mRNA pellet을 녹여서 사용 이 방법이 원시적이긴 하지만 조직에서 mRNA분리하는데는 거의 바이블 입니다. 그럼 즐실하시기를.... 대전에서 mRNA만 20년 뽑아본 연구원이... >Rat pancreas의 RNA를 isolation 중입니다. >pancreas tissue를 trizol을 사용하여 isolation을 하였는데 모두 degredation되었습니다. > >web상에 search해 본 결과 UltraClean ™ Tissue RNA Isolation Kit (MO Biolaboratories.Inc)제품이 있는데 사용해 보신분의 조언을 부탁드립니다. >혹시 다른 방법으로 isolation 할 수 있는 방법이 있으면 많은 조언 부탁드립니다.