2005-07-14
org.kosen.entty.User@4ee9b7fd
박승환(biocell75)
- 4
안녕하세요... 제가 클로닝을 해서 단백질 발현을 하고 있는데요... inclusion body를 처리하는데 있어서 미숙하여 질문을 드립니다.... 제 단배질은 50kd 정도이고 pET vector에 클로닝하여 BL21(DE3) 균주에서 expression 하였습니다... soluble 한 form에서는 눈에 띄지 않아서 insoluble한 단백질을 용해시키려 하는데 잘 안되는 군요... 어떠한 방법이 좋은지 아니면 좋은 책이나 논문이라도 참고할만한것이 있으면 좀 가르쳐 주세요...
- inclusion body
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변!
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 4
-
답변
전주홍님의 답변
2005-07-14- 0
참고 문헌을 첨부합니다. 이 논문을 기본으로 한 expert review도 있습니다. > > 안녕하세요... 제가 클로닝을 해서 단백질 발현을 하고 있는데요... inclusion body를 처리하는데 있어서 미숙하여 질문을 드립니다.... 제 단배질은 50kd 정도이고 pET vector에 클로닝하여 BL21(DE3) 균주에서 expression 하였습니다... soluble 한 form에서는 눈에 띄지 않아서 insoluble한 단백질을 용해시키려 하는데 잘 안되는 군요... 어떠한 방법이 좋은지 아니면 좋은 책이나 논문이라도 참고할만한것이 있으면 좀 가르쳐 주세요... -
답변
박승환님의 답변
2005-07-14- 0
> > 안녕하세요... 제가 클로닝을 해서 단백질 발현을 하고 있는데요... inclusion body를 처리하는데 있어서 미숙하여 질문을 드립니다.... 제 단배질은 50kd 정도이고 pET vector에 클로닝하여 BL21(DE3) 균주에서 expression 하였습니다... soluble 한 form에서는 눈에 띄지 않아서 insoluble한 단백질을 용해시키려 하는데 잘 안되는 군요... 어떠한 방법이 좋은지 아니면 좋은 책이나 논문이라도 참고할만한것이 있으면 좀 가르쳐 주세요... -
답변
전주홍님의 답변
2005-07-14- 0
KOSEN REPORTS의 분석자료에 가시면 아래와 같은 제목을 찾으실 수 있습니다. 단백질의 발현과 재접힘 – Inclusion Body로부터 가용 단백질 획득을 위한 효과적 전략 분석자료에서 keyword search를 하시면 쉽게 찾으실 수 있어요... 첨부 파일들도 참고해 보세요... 아래 논문은 제가 많이 참고했던 논문 중의 하나인데 pdf file이 없어서 못 올립니다. Protein folding in vivo and renaturation of recombinant proteins from inclusion bodies. Mol Biotechnol. 1996 Aug;6(1):53-64. > 안녕하세요... 제가 클로닝을 해서 단백질 발현을 하고 있는데요... inclusion body를 처리하는데 있어서 미숙하여 질문을 드립니다.... 제 단배질은 50kd 정도이고 pET vector에 클로닝하여 BL21(DE3) 균주에서 expression 하였습니다... soluble 한 form에서는 눈에 띄지 않아서 insoluble한 단백질을 용해시키려 하는데 잘 안되는 군요... 어떠한 방법이 좋은지 아니면 좋은 책이나 논문이라도 참고할만한것이 있으면 좀 가르쳐 주세요... -
답변
김성훈님의 답변
2005-07-20- 0
제 경험으로 비추어 보건데 pET vector 시리즈를 쓰고 계시니 다른 soluble tag을 가지고 있는 pET vector류 인 pET-32 (Trx, thioredoxin), pET-42 (GST, Glutathion-S-transferase), pET-43b (NusA, anti-termination factor A)와 host 로 E.coli Origami(DE3)pLysS를 쓰시면 100% insoluble protein을 상당 부분 soluble protein으로 만드실수 있을 겁니다 (모두 Novgen 제품 이니까 쉽게 카다로그를 보시면 주문 하실 수 있을 겁니다). 저도 archaea protein 중에서 100% insoluble form으로 만들어지는 것을 위에 언급한 벡터를 이용해 50% 이상 soluble 발현 시킬수 있었습니다. 공연히 trial and error로 고생하지 마시고 다시 클로닝하시기를 권해 드립니다.