2005-08-09
org.kosen.entty.User@2a3cd9d3
이진옥(jolbio)
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primer가 contamination되면 band가 하나도 안보이나요?
어떤 현상이 있는지 궁금합니다.
- primer
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
하재석님의 답변
2005-08-10- 0
이상하게도 이 질문에 답변하시는 분이 없네요. 그래서 저도 잘은 모르지만 답변을 합니다. 사실 유전자를 다루시는 분들은 실험 결과가 이상하게 나올때는 먼저 contamination을 생각하게 되는데요, 가장 문제가 될만한 오염은 DNase (혹은 기타 다른 종류의 nuclease들)가 되겠지요. Plasmid, PCR product, primer 할것없이 전반적으로 전기영동해 보면 band가 끌려 나오거나 아예 안보이기 때문이죠. 하지만 DNase에 오염되는 경우는 그리 흔한 경우는 아닙니다. tip 하나로 여기 저기 사용하는 취미가 있는 분이거나, 특별히 DNase 실험하시는 분들을 제외하면요. 강산, 혹은 알칼리에 오염되어 문제가 발생할 수도 있겠는데요, 일부러하지 않는 이상 이렇게 오염되어 문제가 생기는 경우는 보기 힘들지요. 이 외에는 미생물에 의한 오염이 있을수도 있겠는데요, 사실 눈에 보이지 않아서 그렇지 미생물에 의한 오염은 항상 있다고 보셔도 무방할겁니다. 하지만 혹 미생물에 오염되었더라도 (눈으로 보기에 혼탁할 정도로 다량이 아니라면) 멸균한 3차 증류수에 primer를 녹이고 평소에 냉동보관을 하셨다면 문제될 일은 없다고 보시면 됩니다. 이런 contamination이 없는데도 primer의 band가 안보인다면 아마도 다른 부분에서 문제가 발생했다고 생각하시면 되겠지요. -
답변
박인영님의 답변
2005-10-25- 0
>primer가 contamination되면 band가 하나도 안보이나요? > >어떤 현상이 있는지 궁금합니다. 일반적으로 primer끼리 contamination되면 원하지 않는 band가 더 생길 것입니다. cycle 수를 늘리면 더욱 심하게 되겠죠. band가 하나도 나오지 않았다면 먼저 조건이 안맞았다고 볼 수 있습니다. 온도가 너무 높았다거나 template, dNTP등 buffer 조성이 이상하다거나 등입니다. 온도를 낮춰서, 아니면 Mg을 첨가해서 등으로 조건을 달리해서 PCR을 하십시요.. 그러기는 힘들지만 primer가 깨져있을 수 있습니다. 보통 primer를 DW에 보관하는 데 간혹 깨지는 경우가 있더군요. TE buffer에 녹이셔서 얼려 보관하세요.