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지식나눔

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[Cell cycle 관련]

2005-09-12 org.kosen.entty.User@112e62e9 서강식(sks1379)
  • 1
안녕하십니까? 오늘도 시간가는 줄 모르고 실험에 매진하고 있는 생명공학도입니다. 오늘 제가 질문드리는 내용은 다음과 같습니다. 제가 가지고 있는 어떤 약물을 암세포에 일정농도로 처리한 후 그 세포들의 단백질을 가지고 Western blot을 했습니다. Loading control로서의 Actin의 양은 거의 비슷했구요 시간에 따라서 loading을 했었습니다. 사전에 FACS를 측정했을 때 시간이 지남에 따라 S phase는 증가를 하고 그 외의 주기들은 감소를 했기때문에 CDK와 cyclin들을 가지고 western blot을 하게됐습니다. 제 생각으로는 S phase가 증가했으니까 그와 관련된 CDK2와 Cyclin A,E는 증가를 하고 G1 phase와 관련된 CDK4, CDK6등은 감소를 할것이다라고 생각했습니다. 그외의 CDK와 Cyclin등은 Antibody가 없어서 못했지만요. 결과는 제 예상대로 CDK2는 증가를 했고 CDK4,6는 감소를 했습니다. 아~ 내 생각이 맞았구나 했는데 저희 실험실원이 제 결과를 보더니 오히려 그 반대 결과가 나와야 한다는 것입니다. S phase가 증가 한것은 CDK2가 감소하여 Cell cycle이 그 다음 단계로 잘 넘어가지 못하기 때문이라는 것입니다. CDK4와 6는 증가를 하기 때문에 G1 phase가 감소를 하는 것이라고도 했습니다. 여기서 고민입니다. 제 생각이 맞나요아님 저희 실험실원 말이 맞나요?? 넘 길게 썼지만 조언 부탁드립니다.
  • CDK
  • S phase
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답변 1
  • 답변

    윤철희님의 답변

    2005-09-19
    • 0
    을 다시 한번 살펴보면, G1 = growth and preparation of the chromosomes for replication S = synthesis of DNA (and centrosomes) G2 = preparation for M M = mitosis 으로 구성되어 있습니다. 이러한 Cell Cycle을 조절하는 것으로는 cytoplasm에 존재하는 단백질로서 Cyclins와 Cyclin-dependent kinases (Cdks)가 있습니다. 좀 더 세분해보면, Cyclins 1. a G1 cyclin (cyclin D) 2. S-phase cyclins (cyclins E and A) 3. mitotic cyclins (cyclins B and A) 이들은 각각의 stage에 따라서 증가되고 감소되어집니다. Cyclin-dependent kinases (Cdks) 1. a G1 Cdk (Cdk4) 2. an S-phase Cdk ((Cdk2) 3. an M-phase Cdk (Cdk1) 이들의 세포내 수준은 상당히 stable 하지만 위에 언급한 Cyclins와 결합하여야만 활성화가 되어질 수 있습니다. 따라서 G1 stage에서는 cyclin D와 Cdk4가 결합을 하여서 chromosomes replication 신호를 세포에 전달합니다. 다음에는 SPF가 증가되어지는데 이 기간 동안에 일어나는 일을 보면 예를들어, cyclin A와 Cdk2가 결합을 하고 핵내로 이동을 하여 DNA duplication을 유도하게 됩니다. DNA replication이 계속되어짐에 따라 cyclin E는 파괴되어지고, mitotic cyclins의 함량이 증가되어집니다. 제 생각에는 실험하시는 분들이 이 부분은 모두 찬성을 하시리라 생각합니다. 자세한것은 실험 setting과 결과를 같이 보면 더 명확할 수 있을것 같습니다. 일단 말씀하신것만을 종합하여 의문사항을 지적하여 본다면, (1) arrest의 시기를 정확히 파악하여야 할것 같습니다. 이미 FACS에서 명확히 S phase에서 arrest 된것이 확실 한 것인지, 아니면 다른 분들이 flow cytometry와 친숙하지 않아서인지, 결과의 신빙성이 떨어져서 이를 부정하는지는 명확하지 않습니다. 또한 이때 웨스턴으로 하여 나타난 결과가 apoptosis에 의한 영향을 받지는 않았는지의 확인은 필요할 것으로 보입니다. (2) arrest의 원인이 약물에 의한것이라면, 직접적인 것인지 (S phase 에서) 또는 간접적인것인지도 중요할 것 같습니다. 즉, 신호전달의 가장 중요한 부분이 어느 step에서 영향을 받았느냐 이기 때문이죠.. 물론 이것을 안다면, 위의 질문들에 대한 대답이 대부분 되겠죠.. 원하시는 답변을 드리지 못한것 같습니다.. 제 개인적으로는 정황으로 보았을때 S phase arrest는 일어나지만.. 이를 위한 추가 증명을 하심이 좋을듯 합니다만.. 사견입니다. 좋은 연구결과 내시기 바랍니다.. >안녕하십니까? 오늘도 시간가는 줄 모르고 실험에 매진하고 있는 >생명공학도입니다. 오늘 제가 질문드리는 내용은 다음과 같습니다. >제가 가지고 있는 어떤 약물을 암세포에 일정농도로 처리한 후 그 세포들의 단백질을 가지고 Western blot을 했습니다. Loading control로서의 >Actin의 양은 거의 비슷했구요 시간에 따라서 loading을 했었습니다. >사전에 FACS를 측정했을 때 시간이 지남에 따라 S phase는 증가를 하고 그 외의 주기들은 감소를 했기때문에 CDK와 cyclin들을 가지고 western >blot을 하게됐습니다. 제 생각으로는 S phase가 증가했으니까 그와 관련된 >CDK2와 Cyclin A,E는 증가를 하고 G1 phase와 관련된 CDK4, CDK6등은 감소를 할것이다라고 생각했습니다. 그외의 CDK와 Cyclin등은 Antibody가 없어서 못했지만요. 결과는 제 예상대로 CDK2는 증가를 했고 CDK4,6는 감소를 >했습니다. 아~ 내 생각이 맞았구나 했는데 저희 실험실원이 제 결과를 >보더니 오히려 그 반대 결과가 나와야 한다는 것입니다. S phase가 증가 >한것은 CDK2가 감소하여 Cell cycle이 그 다음 단계로 잘 넘어가지 못하기 때문이라는 것입니다. CDK4와 6는 증가를 하기 때문에 G1 phase가 >감소를 하는 것이라고도 했습니다. 여기서 고민입니다. 제 생각이 맞나요아님 저희 실험실원 말이 맞나요?? 넘 길게 썼지만 조언 부탁드립니다.
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    을 다시 한번 살펴보면, G1 = growth and preparation of the chromosomes for replication S = synthesis of DNA (and centrosomes) G2 = preparation for M M = mitosis 으로 구성되어 있습니다. 이러한 Cell Cycle을 조절하는 것으로는 cytoplasm에 존재하는 단백질로서 Cyclins와 Cyclin-dependent kinases (Cdks)가 있습니다. 좀 더 세분해보면, Cyclins 1. a G1 cyclin (cyclin D) 2. S-phase cyclins (cyclins E and A) 3. mitotic cyclins (cyclins B and A) 이들은 각각의 stage에 따라서 증가되고 감소되어집니다. Cyclin-dependent kinases (Cdks) 1. a G1 Cdk (Cdk4) 2. an S-phase Cdk ((Cdk2) 3. an M-phase Cdk (Cdk1) 이들의 세포내 수준은 상당히 stable 하지만 위에 언급한 Cyclins와 결합하여야만 활성화가 되어질 수 있습니다. 따라서 G1 stage에서는 cyclin D와 Cdk4가 결합을 하여서 chromosomes replication 신호를 세포에 전달합니다. 다음에는 SPF가 증가되어지는데 이 기간 동안에 일어나는 일을 보면 예를들어, cyclin A와 Cdk2가 결합을 하고 핵내로 이동을 하여 DNA duplication을 유도하게 됩니다. DNA replication이 계속되어짐에 따라 cyclin E는 파괴되어지고, mitotic cyclins의 함량이 증가되어집니다. 제 생각에는 실험하시는 분들이 이 부분은 모두 찬성을 하시리라 생각합니다. 자세한것은 실험 setting과 결과를 같이 보면 더 명확할 수 있을것 같습니다. 일단 말씀하신것만을 종합하여 의문사항을 지적하여 본다면, (1) arrest의 시기를 정확히 파악하여야 할것 같습니다. 이미 FACS에서 명확히 S phase에서 arrest 된것이 확실 한 것인지, 아니면 다른 분들이 flow cytometry와 친숙하지 않아서인지, 결과의 신빙성이 떨어져서 이를 부정하는지는 명확하지 않습니다. 또한 이때 웨스턴으로 하여 나타난 결과가 apoptosis에 의한 영향을 받지는 않았는지의 확인은 필요할 것으로 보입니다. (2) arrest의 원인이 약물에 의한것이라면, 직접적인 것인지 (S phase 에서) 또는 간접적인것인지도 중요할 것 같습니다. 즉, 신호전달의 가장 중요한 부분이 어느 step에서 영향을 받았느냐 이기 때문이죠.. 물론 이것을 안다면, 위의 질문들에 대한 대답이 대부분 되겠죠.. 원하시는 답변을 드리지 못한것 같습니다.. 제 개인적으로는 정황으로 보았을때 S phase arrest는 일어나지만.. 이를 위한 추가 증명을 하심이 좋을듯 합니다만.. 사견입니다. 좋은 연구결과 내시기 바랍니다.. >안녕하십니까? 오늘도 시간가는 줄 모르고 실험에 매진하고 있는 >생명공학도입니다. 오늘 제가 질문드리는 내용은 다음과 같습니다. >제가 가지고 있는 어떤 약물을 암세포에 일정농도로 처리한 후 그 세포들의 단백질을 가지고 Western blot을 했습니다. Loading control로서의 >Actin의 양은 거의 비슷했구요 시간에 따라서 loading을 했었습니다. >사전에 FACS를 측정했을 때 시간이 지남에 따라 S phase는 증가를 하고 그 외의 주기들은 감소를 했기때문에 CDK와 cyclin들을 가지고 western >blot을 하게됐습니다. 제 생각으로는 S phase가 증가했으니까 그와 관련된 >CDK2와 Cyclin A,E는 증가를 하고 G1 phase와 관련된 CDK4, CDK6등은 감소를 할것이다라고 생각했습니다. 그외의 CDK와 Cyclin등은 Antibody가 없어서 못했지만요. 결과는 제 예상대로 CDK2는 증가를 했고 CDK4,6는 감소를 >했습니다. 아~ 내 생각이 맞았구나 했는데 저희 실험실원이 제 결과를 >보더니 오히려 그 반대 결과가 나와야 한다는 것입니다. S phase가 증가 >한것은 CDK2가 감소하여 Cell cycle이 그 다음 단계로 잘 넘어가지 못하기 때문이라는 것입니다. CDK4와 6는 증가를 하기 때문에 G1 phase가 >감소를 하는 것이라고도 했습니다. 여기서 고민입니다. 제 생각이 맞나요아님 저희 실험실원 말이 맞나요?? 넘 길게 썼지만 조언 부탁드립니다.
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