2005-09-22
org.kosen.entty.User@4c08c45c
박지원(pjw082)
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제가 지금 hela S3, A549, SW480과 더불어서 K562 cell에도
siRNA를 이용해서 transfection을 하려고 하는데요
K562 cell처럼 suspension cell도 다른 붙어자라는 셀처럼lipofectamine2000으로 transfection하는 방법으로 해도 되나요?
그리고 이 방법이 된다면 transfection efficiency를 보기위해서 FITC-scrambled siRNA를 transfection 시켰을 경우 걔는 어떻게 confocal로 봐야할까요?
- siRNA
- K562
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답변 2
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답변
전주홍님의 답변
2005-09-22- 0
Adherent cell도 tranfection efficiency를 높히기 위해 detach후 suspension된 상태에서 tranfection 실험을 하기도 합니다. Suspension cell을 slide 등에 붙이기 위해서는 poly-L-lysine과 같은 glue material을 coating한 slide 혹은 plate에 cell을 넣은 후 cytospin을 이용하면 부착시킬 수 있습니다. 그런 후 immunofluorescence microscopy나 laser scanner confocal microscopy를 이용할 수 있습니다. 세포의 갯수가 충분하다면 FACS 분석도 가능하겠죠... >제가 지금 hela S3, A549, SW480과 더불어서 K562 cell에도 >siRNA를 이용해서 transfection을 하려고 하는데요 >K562 cell처럼 suspension cell도 다른 붙어자라는 셀처럼lipofectamine2000으로 transfection하는 방법으로 해도 되나요? >그리고 이 방법이 된다면 transfection efficiency를 보기위해서 FITC-scrambled siRNA를 transfection 시켰을 경우 걔는 어떻게 compocal로 봐야할까요? -
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박인영님의 답변
2005-10-04- 0
>제가 지금 hela S3, A549, SW480과 더불어서 K562 cell에도 >siRNA를 이용해서 transfection을 하려고 하는데요 >K562 cell처럼 suspension cell도 다른 붙어자라는 셀처럼lipofectamine2000으로 transfection하는 방법으로 해도 되나요? >그리고 이 방법이 된다면 transfection efficiency를 보기위해서 FITC-scrambled siRNA를 transfection 시켰을 경우 걔는 어떻게 confocal로 봐야할까요? Gelatin 0.1% solution을 만들고 autoclave하신 후, cover glass를 15분 ~ 30분 동안 담궈놓으시면 잘 안붙는 cell도 자~알 붙습니다. Gelatin coating한 cover glass를 culture dish에 넣고 cell을 깔면 됩니다. 나중에 media change하면 culture dish에는 cell이 없고 cover glass위에만 달라붙어 있게 됩니다. Cover glass를 slide에 엎어놓고 메니큐로 sealing하면 보실 수 있을 껍니다.