2005-10-04
org.kosen.entty.User@c655a03
임채진(kwcl)
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knock-out으로 기능분석 시 lethal해서 knocok-out으로 분석이 불가능한 단백질이 있을 것 같은데 어떠한 것들이 있는지 궁금합니다.
또 그런 경우 어떤 방법으로 실험을 진행하는지 궁금합니다.
고언 부탁드립니다..^^
- knock-out
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답변 3
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답변
박인영님의 답변
2005-10-04- 0
>knock-out으로 기능분석 시 lethal해서 knocok-out으로 분석이 불가능한 단백질이 있을 것 같은데 어떠한 것들이 있는지 궁금합니다. >또 그런 경우 어떤 방법으로 실험을 진행하는지 궁금합니다. > >고언 부탁드립니다..^^ 일반적으로 세포 내 필수적인 역할을 하는 단백질들은 거의 embryonic lethal하다고 보시면 되겠지요..물론 예외도 많지만.. Heterozygote (+/-)의 phenotype은 embryonic lethal이 아닐 수 있습니다. 그래서 strain 유지는 heterozygote형태로 유지시키고, developmental defects를 볼 때에는 heterozygote끼리 mating을 통해 얻습니다.. +/+, +/-. -/-의 embryo들을 한꺼번에 얻을 수 있으니 control도 포함되어 좋겠지요.. 다른 한 방법은 conditional KO mice를 얻는 것인 데.. 두 개의 loxP site를 알아보려는 gene의 intron 부분에 집어넣고..cre transgenic mice와 교배를 시키면 loxP site 사이 부분이 deletion되어 KO시키는 방법입니다. cre의 발현을 조절하면 tissue specific KO도 가능하겠지요.. -
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전주홍님의 답변
2005-10-04- 0
Knockout mice에 대한 database가 여러개 있겠지만, http://www.bioscience.org/knockout/knochome.htm에서 확인하실 수 있습니다. Prenatal, postnatal, perinatal mortality가 있는 knockout mice와 viable한 knockout mice로 구분해 두어 분류해 놓았습니다. Mouse model을 만든다면, conditional knockout system을 사용을 하는 방법이 있을 수 있습니다. 또는 dominant negative transgenic을 만들 수 도 있습니다. 만약 heterzygote에서 특정 현상이 나타나면 (+/-)를 이용하여 연구를 진행 할 수 있습니다. 마우스가 태아 상태에서 죽기전에 mouse embryonic fibroblast를 만들어 단백질의 기능을 세포수준에서 연구할 수도 있습니다.물론 각각의 시스템에는 장단점이 다 있습니다. -
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최재혁님의 답변
2005-10-10- 0
KNOCK-OUT으로 알 수 없는 기능은 ACTIVATION을 통해서 알아내기도 합니다. 과발현시켜주는 프로모터를 삽입하면 KNOCK-OUT의 경우처럼 기능을 완전히 상실하는 것이 아니기 때문에 생물체가 죽지 않습니다. 또한가지 방법은 형광물질을 발현하는 시키는 경우로 GFP를 발현하는 유전자를 넣어주면 특정 PHENOTYPE이 형광을 띄게 됩니다. 그렇게 하면 어느 부분에 관련된 유전자인지 쉽게 알수있습니다.