2005-12-29
org.kosen.entty.User@18b40ddf
박창욱(parkcw80)
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mutagenesis에 대해서 알고 싶습니다.
이 실험의 목적에 대해서와 실험과정에 대한
outline에 대해서 물어보고 싶습니다...
답변을 기다리겠습니다. 감사합니다.
- mutagenesis
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
전주홍님의 답변
2005-12-29- 0
Mutagenesis는 크게 두가지로 나누어 생각해 볼 수 있을 것 같습니다. 하나는 특정 화학물의 독성을 평가하는 하나의 측도입니다. Ame's test가 가장 유명한 예 중의 하나일 것입니다. 세포의 유전물질에 대한 화학물의 영향를 평가하는 것이죠. 다른 하나는 단백질 구조와 기능의 문제를 밝히는 하나의 실험 tool로써 사용됩니다. 유전자의 염기서열에 변이가 일어나면 아미노산 서열이 변할 가능성이 있습니다 (물론 codon에 따라 안 변할 수도 있지요). 이러한 아미노산의 변이는 단백질의 구조와 기능에 영향을 줄 수 있습니다. 이러한 변이가 단백질의 기능에 심각한 영향을 준다면 생체의 생명현상에 이상을 초래할 수도 있겠죠...즉 질환과 직결될 수 있습니다. 거의 대부분은 먼저 환자 샘플에서 유전자 변이를 찾아내고 이 변이가 단백질의 기능에 어떻게 영향을 미치는 지를 알아내는 실험을 거칩니다. 물론 동물 모델에서 mutation이 된 유전자를 집어넣는 Knock-in 실험을 해서 개체 수준에서 mutation의 영향을 살펴보기도 합니다. 이를 요약하면 첫째, 단백질의 구조와 기능의 관계를 확인할 수 있습니다. 둘째, 이러한 것을 통해 질환 발병의 원인과 과정을 연구할 수 있습니다. 셋째, 변이와 질환과의 인과관계가 결정될 수 있다면 치료제 개발의 가능성을 제공할 수 있습니다. 실험적으로는 random mutagenesis와 targeted mutagenesis로 나누어 볼 수 있는데 targeted mutagenesis의 경우 mutation된 primer를 사용하는 PCR기법이 가장 많이 사용되고 있습니다. >mutagenesis에 대해서 알고 싶습니다. >이 실험의 목적에 대해서와 실험과정에 대한 >outline에 대해서 물어보고 싶습니다... >답변을 기다리겠습니다. 감사합니다. -
답변
김기윤님의 답변
2006-01-02- 0
>mutagenesis에 대해서 알고 싶습니다. >이 실험의 목적에 대해서와 실험과정에 대한 >outline에 대해서 물어보고 싶습니다... >답변을 기다리겠습니다. 감사합니다. mutagenesis실험의 목적은 크게 2가지가 아닐까 싶은데요. 우선, DNA의 sequence를 바꿔줘서 target enzyme site를 없애거나, 만들어줄때 사용하고, 둘째, DNA 서열을 바꿈으로 해서 아미노산서열에 변화를 주어 protease에 대한 protection을 하거나, 단백질의 activity를 증가시키거나 확 떨어뜨리거나 할때 이용하겠지요. 실험 방법을 PCR을 이용한 방법인데. 제일 쉬운 방법은 Pfu polymerase를 이용하여 mutation을 포함한 primer 1쌍을 가지고 통째로 (vector + insert) PCR을 하는 것입니다. 추후 template는 DpnI enzyme으로 제거하구요. 그런다음 transformation시켜 E.coli에서 대량으로... 확인은 plasmid분리하여 sequencing하면 되겠지요. 그럼...