2006-02-16
org.kosen.entty.User@64eaed03
김현령(isabelle)
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안녕하세요
세포 고정시킬때 지금까지 1% 파라포름알데하이드를 썼는데...이게 제세포들에게 매우 쌘것처럼 느껴져서..
다른 논문들을 찾아보니까 아세톤이나 메탄올같은거를 쓰던데...
조성을 어떻게해서 쓰면 되는지 궁금합니다...
아시는분은 답변을 올려주시면 감사하겠습니다.
그럼 이만
안녕히계세요
- cell fixation
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
신정규님의 답변
2006-02-17- 0
>안녕하세요 >세포 고정시킬때 지금까지 1% 파라포름알데하이드를 썼는데...이게 제세포들에게 매우 쌘것처럼 느껴져서.. > >다른 논문들을 찾아보니까 아세톤이나 메탄올같은거를 쓰던데... > >조성을 어떻게해서 쓰면 되는지 궁금합니다... > >아시는분은 답변을 올려주시면 감사하겠습니다. > >그럼 이만 > >안녕히계세요 어떤 용도로 세포를 고정시키실려고 하는지 모르겠으나 SEM이나 TEM을 찍을 때 세포 고정을 하기 위해서 glutaraldehyde를 사용하였던 것 같습니다. 고정을 한번에 하는 것은 아니고 1차, 2차에 나누어서 하였던 걸로 기억하는데. 1차 고정액으로는 2.5% glutaraldehyde in distilled water, 2차 고정액으로는 1-4% osmium tetroxide in distilled water를 사용하였고 각각 distilled water로 washing하였고 2차 세척 후 ethanol로 gredient를 걸어서 최종적으로 washing하였던 걸로 기억합니다. -
답변
고윤제님의 답변
2006-02-17- 0
보통 SEM 찍을때는 삼투압의 원리를 이용하여 3가지 다른 농도의 에탄을을 이용하여 세포속의 물기를 제거합니다. 즉 50% 70% 90% 농도의 에탄올 수용액을 준비한후 처음엔 50%로 처리하고 다음은 70% 다음은 90%로 처리하면 세포속의 물기가 거의 다 밖으로 빠져 나갑니다. 그후 에탄올은 흡인하고, 글루타알데하이드를 뿌려주면 세포의 단백질 성분이 굳어버립니다. TEM을 찍을때는 보통 냉동시편제작하여 자르는 법과, 에폭시수지로 고정 하여 자르는법을 시편을 제작하는걸로 알고 있습니다. 세포라서 냉동시편제작방법으로 해야 할거같네요^^ 그럼이만~ >안녕하세요 >세포 고정시킬때 지금까지 1% 파라포름알데하이드를 썼는데...이게 제세포들에게 매우 쌘것처럼 느껴져서.. > >다른 논문들을 찾아보니까 아세톤이나 메탄올같은거를 쓰던데... > >조성을 어떻게해서 쓰면 되는지 궁금합니다... > >아시는분은 답변을 올려주시면 감사하겠습니다. > >그럼 이만 > >안녕히계세요