2006-02-17
org.kosen.entty.User@2a3a2d07
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단백질 분해효소의 활성을 측정하는 방법에는 어떤 것들이 있는 지 궁금
합니다. 정량적인 방법과 정성적인 방법이 있을텐데 제가 알고 있는 방법
에는 정성적인 방법으로 casein 배지를 이용한 clear zone의 유무로 판단
하는 방법이 있고, 정량적인 방법에는 azo-casein을 이용한 Braun &
Schmitz 법이 있습니다. 이 외의 방법을 아시는게 있다면 자세한 프로토콜
을 가르쳐주셨으면 감사하겠습니다.
- protease assay
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답변 2
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답변
배우철님의 답변
2006-02-17- 0
저같은 경우에는 protease inhibitor 시험을 할 때 protease assay kit을 이용했습니다. 기본 원리는 casein을 이용하는 방법과 동일한데요....succinylated casein을 기질로 이용해서 이 기질이 분해되서 만들어지는 펩타이드가 trinitrobenzene sulfonic acid (TNBSA)와 반응하여 노란색을 띠게 됩니다. 제가 사용한 제품은 Pierce 제품입니다. http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=02020201 전혀 다른 원리를 이용하는 방법을 찾으신다면 부족한 답변이 되겠네요.. -
답변
하재석님의 답변
2006-02-17- 0
윗분이 말씀하신 기질과 마찬가지로 casein에resorufin [N-(resorufin-4-carbonyl)piperidine-4-carbonic acid N-hydroxysuccinimide ester] 이라는 물질을 label한 제품이 있습니다. Roche에서 Universal Protease Substrate라는 이름으로 판매하는데요, 가격이 비싸서 그렇지 감도는 매우 좋았던 것으로 기억합니다. Protocol도 매우 간단하고요 (Roche의 홈페이지에서 검색해 보니 지금도 설명서 다운로드가 가능하네요), 무엇보다 장점은 소량으로도 정량적인 분석이 가능하기 때문에 96-well 또는 384-well plate와 적절한 reader만 있다면 HTS에 매우 좋을것으로 생각됩니다. 어쩌다 보니 제품 광고처럼 되어버렸네요.....