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지식나눔

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membrane protein overexpression

2006-02-23 org.kosen.entty.User@4a63d989 김수연(biosy)
  • 3
안녕하세요.. 제가 membrane protein을 overexpresssion 시키고자 합니다.. 다양한 vector를 사용해 봤으나, induction이 잘 되지 않는데. 혹시 이쪽으로 실험이 잘 되시는 분이나, membrane protein을 overexpression 시켜 보신분 어케 하셨는지 알려주세요~~
  • protein
  • overexpression
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답변 3
  • 답변

    김은민님의 답변

    2006-02-23
    • 0
    induction할 protein이 membrane protein이라는 말씀이시죠? 그리고 bacteria 에서 IPTG induction을 하신다는 말씀이신지..? 정확하게 어떤게 궁금하신지.. 왜 overexpression이 안되는지.. 실험 컨디션을 짧게나마 적어주시면 답변해드리기 좋을 것같습니다. vector는 어떤 vector를 사용하셨나요? > >안녕하세요.. >제가 membrane protein을 overexpresssion 시키고자 합니다.. > >다양한 vector를 사용해 봤으나, induction이 잘 되지 않는데. >혹시 이쪽으로 실험이 잘 되시는 분이나, >membrane protein을 overexpression 시켜 보신분 >어케 하셨는지 알려주세요~~
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    induction할 protein이 membrane protein이라는 말씀이시죠? 그리고 bacteria 에서 IPTG induction을 하신다는 말씀이신지..? 정확하게 어떤게 궁금하신지.. 왜 overexpression이 안되는지.. 실험 컨디션을 짧게나마 적어주시면 답변해드리기 좋을 것같습니다. vector는 어떤 vector를 사용하셨나요? > >안녕하세요.. >제가 membrane protein을 overexpresssion 시키고자 합니다.. > >다양한 vector를 사용해 봤으나, induction이 잘 되지 않는데. >혹시 이쪽으로 실험이 잘 되시는 분이나, >membrane protein을 overexpression 시켜 보신분 >어케 하셨는지 알려주세요~~
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  • 답변

    김수연님의 답변

    2006-02-23
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    > >안녕하세요.. >제가 membrane protein을 overexpresssion 시키고자 합니다.. > >다양한 vector를 사용해 봤으나, induction이 잘 되지 않는데. >혹시 이쪽으로 실험이 잘 되시는 분이나, >membrane protein을 overexpression 시켜 보신분 >어케 하셨는지 알려주세요~~ 좀더 자세히 설명해드리면, E.coli에서 IPTG indcution 을 통해 membrane protein을 expression 시켰습니다.. 사용해본 vector로는 pET, pGEX 를 사용하였고, 지금은 pTYB2에 cloning 중입니다.. 조건은 다양하게 37도, 30도, 20에서 각각 IPTG 0.2mM, 1mM를 처리하여 induction 시켰습니다.. 근데 이 단백질이 induction이 도통되질 않네요.. 에궁, 유경험자들 경험담좀 들려주세요.
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    > >안녕하세요.. >제가 membrane protein을 overexpresssion 시키고자 합니다.. > >다양한 vector를 사용해 봤으나, induction이 잘 되지 않는데. >혹시 이쪽으로 실험이 잘 되시는 분이나, >membrane protein을 overexpression 시켜 보신분 >어케 하셨는지 알려주세요~~ 좀더 자세히 설명해드리면, E.coli에서 IPTG indcution 을 통해 membrane protein을 expression 시켰습니다.. 사용해본 vector로는 pET, pGEX 를 사용하였고, 지금은 pTYB2에 cloning 중입니다.. 조건은 다양하게 37도, 30도, 20에서 각각 IPTG 0.2mM, 1mM를 처리하여 induction 시켰습니다.. 근데 이 단백질이 induction이 도통되질 않네요.. 에궁, 유경험자들 경험담좀 들려주세요.
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    김은민님의 답변

    2006-02-24
    • 0
    가장 중요한것은 induction 시킬 유전자의 cloning할때에 frame입니다. 물론 가장 기본적인 것이기 때문에 sequencing하여 확인 하셨을 테지만, 다시한번 자세히 들여다보세요~ 또 induction하시고 protein gel 내려서 coomasie stain만 하셨나요? 아니면 western도 해보셨나요? induction되는 양이 많이 적으면 coomasie stain으로는 확인이 안된답니다. western을 해보세요~His나 GST antibody로요~~ 님께서 여러가지 condition으로 동일한 유전자를 많은 vector system에 cloning하여 진행하시고 계신것같은데요...해봐야할 실험 컨디션은 계속 하시고 계신것같습니다. IPTG 농도나 온도..induction이 안될때 시도해봐야하는 실험들을 하셨네요~ 그런데 제 경험상으로, pET vector system이나 pGEX system에서 induction이 잘 안되는 경우에는 컨디션을 아무리 맞추어도 많은 양을 얻을 수 없다는 것입니다. 혹시 유전자의 full CDS를 induction하는 것이 아니라 유전자의 부분만을 cloning하여 induction하는 것이라면 다른 부분을 선택해서 induction해보세요~ 생각보다 잘 될수도 있잖아요~? 시원한 대답이 못된것같습니다(T.T).zz 으？X으？X 힘내시구요!! > >안녕하세요.. >제가 membrane protein을 overexpresssion 시키고자 합니다.. > >다양한 vector를 사용해 봤으나, induction이 잘 되지 않는데. >혹시 이쪽으로 실험이 잘 되시는 분이나, >membrane protein을 overexpression 시켜 보신분 >어케 하셨는지 알려주세요~~
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    가장 중요한것은 induction 시킬 유전자의 cloning할때에 frame입니다. 물론 가장 기본적인 것이기 때문에 sequencing하여 확인 하셨을 테지만, 다시한번 자세히 들여다보세요~ 또 induction하시고 protein gel 내려서 coomasie stain만 하셨나요? 아니면 western도 해보셨나요? induction되는 양이 많이 적으면 coomasie stain으로는 확인이 안된답니다. western을 해보세요~His나 GST antibody로요~~ 님께서 여러가지 condition으로 동일한 유전자를 많은 vector system에 cloning하여 진행하시고 계신것같은데요...해봐야할 실험 컨디션은 계속 하시고 계신것같습니다. IPTG 농도나 온도..induction이 안될때 시도해봐야하는 실험들을 하셨네요~ 그런데 제 경험상으로, pET vector system이나 pGEX system에서 induction이 잘 안되는 경우에는 컨디션을 아무리 맞추어도 많은 양을 얻을 수 없다는 것입니다. 혹시 유전자의 full CDS를 induction하는 것이 아니라 유전자의 부분만을 cloning하여 induction하는 것이라면 다른 부분을 선택해서 induction해보세요~ 생각보다 잘 될수도 있잖아요~? 시원한 대답이 못된것같습니다(T.T).zz 으？X으？X 힘내시구요!! > >안녕하세요.. >제가 membrane protein을 overexpresssion 시키고자 합니다.. > >다양한 vector를 사용해 봤으나, induction이 잘 되지 않는데. >혹시 이쪽으로 실험이 잘 되시는 분이나, >membrane protein을 overexpression 시켜 보신분 >어케 하셨는지 알려주세요~~
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