2006-03-20
org.kosen.entty.User@e7165a3
김동현(uri97)
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누드마우스에 rat hybridoma B cell line을 injection하여 얻은 ascites에서 항체를 정제하고자 합니다.
Protein G column을 사용하여 정제하고자 하는데 정제를 하고 나서도 알부민으로 추정되는 단백질이 많이 포함되어 있습니다.
보다 순수하게 항체만 정제할 수 있는 방법을 알고 싶습니다.
(적절한 washing buffer 조성, 또는 알부민 제거 방법, 다른 정제 방법 등등)
#1.
현재 사용하는 buffer 조성은
1. washing : 0.1M glycine pH7.0
2. elution : 0.1M glycine pH3.0
입니다.
#2.
알부민 제거하는 kit가 있는 것으로 알고 있는데, 제거할 수 있는 capacity가 적어서 그걸 사용하기는 힘들거 같네요.
혹시 많은 양의 알부민을 제거할 수 있는 방법이 있으면 좋겠습니다.
- albumin
- Ab purification
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답변 3
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답변
전주홍님의 답변
2006-03-20- 0
Albumin 오염이 상당히 많이 되는 게 사실입니다. 실험과정을 한두가지 첨가하셔야 조금 더 깨끗하게 정제가 될 수 있을 것 같습니다. 한가지는 protein-G column을 사용하기 전에 ammonium sulfate로 salting out을 하고 dialysis 혹은 desalting column을 이용한 후 protein-G column에 loading하는 방법입니다. 다른 한가지는 protein-G column chromatography 후 size exclusion chromatography를 이용하여 제거하는 방법입니다. >누드마우스에 rat hybridoma B cell line을 injection하여 얻은 ascites에서 항체를 정제하고자 합니다. >Protein G column을 사용하여 정제하고자 하는데 정제를 하고 나서도 알부민으로 추정되는 단백질이 많이 포함되어 있습니다. >보다 순수하게 항체만 정제할 수 있는 방법을 알고 싶습니다. >(적절한 washing buffer 조성, 또는 알부민 제거 방법, 다른 정제 방법 등등) > >#1. >현재 사용하는 buffer 조성은 >1. washing : 0.1M glycine pH7.0 >2. elution : 0.1M glycine pH3.0 >입니다. > >#2. >알부민 제거하는 kit가 있는 것으로 알고 있는데, 제거할 수 있는 capacity가 적어서 그걸 사용하기는 힘들거 같네요. >혹시 많은 양의 알부민을 제거할 수 있는 방법이 있으면 좋겠습니다. > > -
답변
배우철님의 답변
2006-03-20- 0
저같은 경우는 Prochem사의 Proteus protein A, G kit를 이용해 보았는데요.. 수율이 좋았고.. 다른 단백질도 많이 나오지 않았습니다.. -
답변
임채진님의 답변
2006-03-21- 0
>누드마우스에 rat hybridoma B cell line을 injection하여 얻은 ascites에서 항체를 정제하고자 합니다. >Protein G column을 사용하여 정제하고자 하는데 정제를 하고 나서도 알부민으로 추정되는 단백질이 많이 포함되어 있습니다. >보다 순수하게 항체만 정제할 수 있는 방법을 알고 싶습니다. >(적절한 washing buffer 조성, 또는 알부민 제거 방법, 다른 정제 방법 등등) > >#1. >현재 사용하는 buffer 조성은 >1. washing : 0.1M glycine pH7.0 >2. elution : 0.1M glycine pH3.0 >입니다. > >#2. >알부민 제거하는 kit가 있는 것으로 알고 있는데, 제거할 수 있는 capacity가 적어서 그걸 사용하기는 힘들거 같네요. >혹시 많은 양의 알부민을 제거할 수 있는 방법이 있으면 좋겠습니다. > > washing 시 pH를 5나 6으로 낮추거나 NaCl을 150-300mM 정도 추가해서 해보세요.. 이것저것 다른 정제가 추가되면야 좋지만 시간이 많이 걸리니까요.. Ionic strength를 줘서 washing해보세요..