2006-03-21
org.kosen.entty.User@1092eb6f
황동규(dong3772)
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E.coli에서 단백질 발현시 soluble하게 얻을수 있는 방법이 여러가지 있는걸로 알고 있는데
각각의 방법들에 관해 알고 싶습니다.
- recombinant expression in E.coli
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
전주홍님의 답변
2006-03-22- 0
inclusion body의 생성원인은 대체로 misfolding에 의한 것으로 보고 있습니다. 그로 인해 hydrophobic interaction이 증가하여 aggregation되는 것으로 생각합니다. 그러므로 misfolding을 줄이기 위해 culture condition을 조절하는 방법을 많이 사용하고 있습니다. 즉 단백질이 천천히 만들어지면 correct folding이 될 가능성이 높아지기 때문입니다. 그래서 온도를 실온이하로 낮추어 박테리아 배양을 하는 방법을 많이 사용합니다. 또한 aggregation에 대한 kinetics를 보면 단백질의 농도가 높을 수록 aggregation이 잘 생기기 때문에 단백질 농도를 낮추는 방법을 사용하는 예도 많습니다. 대표적인 방법으로는 IPTG 등의 inducer의 농도를 낮추어 사용하거나 induction time을 짧게 하는 방법이 있습니다. Fusion system을 사용할 경우 NusA fusion system이 권장되기도 합니다. NusA는 대장균 단백질 중 가장 solubility가 높기 때문에 heterologous expression시 soluble protein을 얻을 수 있는 확률이 굉장히 높아지게 됩니다. -
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정철웅님의 답변
2006-03-22- 0
일반적으로 하는 시도는 낮은 온도 4~16도에서 induction을 하면 soluble하게 많이 갑니다. 또한 일반적으로 사용하는 Tag이 달린 벡터를 사용하면 soluble하게되는데,His, GST, MBP 등이 있는데 큰 것을 달수록 solubility가 좋아집니다. -
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배우철님의 답변
2006-03-22- 0
Invitrogen의 thioredoxin fusion protein expression system입니다. 또 다른 것은 Novagen의 His Tag이 포함된 thiofusion vector (pET32)입니다.. 단백질의 soluble 문제 해결에 많이 이용됩니다.. >E.coli에서 단백질 발현시 soluble하게 얻을수 있는 방법이 여러가지 있는걸로 알고 있는데 > >각각의 방법들에 관해 알고 싶습니다.