2006-03-28
org.kosen.entty.User@109b0c7f
김유리(duree)
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골세포인 osteoblast를 glutaldegyde로 고정하고 있는데요
고정이 잘된 세포도 있으나 종종 세포가 터져서 나오더라구요.
프로토콜은 아래와 같은데요 잘못된 부분이 있는지 확인좀 부탁드려요.
① 배지를 버리고 PBS로 1회 washing
② 2.5% glutaldehyde 20분(냉장보관)
③ PBS washing 10분 x 2(상온)
④ OsO4 (냉장보관, 20분)
⑤ PBS washing 10분 x 2
⑥ EtOH 70% (냉장보관 10분)
⑦ EtOH 80% (냉장보관 10분)
⑧ EtOH 90% (냉장보관 10분)
⑨ EtOH 95% (냉장보관 10분)
⑩ EtOH 100% (냉장보관 10분) x 2
⑪ 1,1,1,3,3,3-Hexamethyl disilazane 30분 x 2
⑫ 열어서 11번 날리면서 overnight
⑬ SEM 관찰
- SEM
- osteoblast
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
동광식님의 답변
2006-04-05- 0
도움이 될지 모르겠네요. > >① 배지를 버리고 PBS로 1회 washing ---- 37℃또는 상온 2회 >② 2.5% glutaldehyde 20분(냉장보관) ---- PBS나 HBSS로 회석(물로 회석하면 세포가 깨짐) 37℃또는 상온. * 온도와 이온 농도의 변화를 최소화시키기 위함. >③ PBS washing 10분 x 2(상온) >④ OsO4 (냉장보관, 20분) ----상온 >⑤ PBS washing 10분 x 2 >⑥ EtOH 70% (냉장보관 10분) ----4℃나 ice-cool EtOH를 사용(이하동일) >⑦ EtOH 80% (냉장보관 10분) >⑧ EtOH 90% (냉장보관 10분) >⑨ EtOH 95% (냉장보관 10분) >⑩ EtOH 100% (냉장보관 10분) x 2 >⑪ 1,1,1,3,3,3-Hexamethyl disilazane 30분 x 2 >⑫ 열어서 11번 날리면서 overnight >⑬ SEM 관찰 >