2006-03-30
org.kosen.entty.User@5d07142b
김선명(iwill75)
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microinjection 효율에 관한 질문입니다.
현재 cell에 peptide를 넣는 microinjection 실험을 하고 있습니다. 조건을 간단히 말씀드리면,
* cell line : NIH-3T3
* injection pressure : 50~100 hPa
* injection time : 0.5~0.7 sec
* marker of microinjected cell : FITC-dextran (Sigma, FSD-10S)
* incubation time after microinjection : 1~4 hr
제가 microinjection하려고 하는 것은 peptide인데, 이를 FITC-dextran과 injection buffer를 을 섞어서 쓰고 있습니다. Eppendorf사의 micromanipulator와 microinjection를 이용하여 대략 50개 정도를 찌른 다음, 1~4 hr incubation 시키고 나서 PFA fixation --> Triton X100 permeabilization --> 형광현미경으로 관찰을 합니다.
문제는 효율이 매우 낮다는 겁니다. 대략 50여개중에 보이는 것은 평균 5개 미만입니다. 실제 제대로 들어간 것이 5개뿐인 것이 아니냐고 할 수 있겠지만, injection을 해 보신 분은 알겠지만 제대로 들어가면 cell내의 sample이 고루 퍼지는 걸로 microinjection 여부를 판단할 수 있습니다. 그런데 이렇게 낮은 효율을 보이는 것은 왜 그럴까요?
FITC-dextran의 농도? stability? IF 방법의 문제? microinjection 방법?
하나씩 하나씩 check를 해봐야겠군요. 님들의 좋은 의견 부탁드립니다.
다들 하시는 일 잘 되시길~
- microinjection
- peptide
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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