2006-04-18
org.kosen.entty.User@1e2f3997
김현미(sinbi1450)
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Bradford법으로 단백질 측정을 하고 있습니다.
문제는 sample에 녹아 있는 buffer가 SDS와 B-mercaptoethanol이라는 것 입니다.
SDS는 0.1%가 넘을 경우 bradford정량에 영향을 준다고 알고 있습니다.
그러면 0.1%미만에서 정량시에는 문제가 없는것인지 알고 싶습니다.
빠른 답변 부탁드립니다.
- bradford
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답변 3
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답변
배우철님의 답변
2006-04-18- 0
회사 제품에 따라서 차이가 있습니다만... 영향이 크지 않다고 보장하는 제품(고마, 인트론 등)은 0.5%, 영향을 받는 제품도 0.1%면 큰 영향은 없을 것입니다.. > >Bradford법으로 단백질 측정을 하고 있습니다. >문제는 sample에 녹아 있는 buffer가 SDS와 B-mercaptoethanol이라는 것 입니다. >SDS는 0.1%가 넘을 경우 bradford정량에 영향을 준다고 알고 있습니다. >그러면 0.1%미만에서 정량시에는 문제가 없는것인지 알고 싶습니다. >빠른 답변 부탁드립니다. -
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김현미님의 답변
2006-04-18- 0
제가 지금 사용하고 있는 SDS는 시그마제품 입니다. SDS 0.01%- 0.09% 까지의 단백질 정량곡선을 그려보니 기울기값이 점점 감소하였습니다. SDS농도에 맞는 정량곡선을 선택하여 농도를 구해도 되는건지요? -
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배우철님의 답변
2006-04-18- 0
측정하려는 단백질 용액에 포함된 SDS 만큼의 양이 들어있는 buffer를 Blank로 설정하시면 SDS의 영향을 배제할 수 있습니다. 물론 SDS가 bradford와 반응하여 일반적인 측정수준을 넘는다면 문제가 있습니다만.. Blank 값의 OD 자체가 높은수치(예를 들어 1.2 이상)가 나오는 경우에 말입니다. 그렇지만 Blank 값을 제하고도 측정할 수 있다면...이런 방식이 절대적인 형태는 아니지만 assay에서 상대 비교로 많이 활용되고 있습니다.. 그리고 SDS가 신경이 쓰이신다면 앞에서 말씀드린 회사의 제품들을 사용하시는 것도 한가지 방법입니다... > >Bradford법으로 단백질 측정을 하고 있습니다. >문제는 sample에 녹아 있는 buffer가 SDS와 B-mercaptoethanol이라는 것 입니다. >SDS는 0.1%가 넘을 경우 bradford정량에 영향을 준다고 알고 있습니다. >그러면 0.1%미만에서 정량시에는 문제가 없는것인지 알고 싶습니다. >빠른 답변 부탁드립니다.