KOSEN 한인과학기술자네트워크

닫기

더 많은 혜택을 위해
로그인 하세요.

지식나눔

지식나눔

phage..

2006-04-20 org.kosen.entty.User@71e53282
  • 1
phage display를 하는데요.. 5차 panning 까지 하고 enrichment 되어서 screening을 하려는데 screening이 안됩니다.. 5차 결과에서 시그널이 강해서 당연히 잘될줄 알았는데.. 1.5ml tube에서 300ul culture 을 해도 안되고.. 100ml culture 해서 PEG down을 시켜도 안되고.... 혹시 screening할수있는 또다른 방법이 있나요??? 그리고 두번째로.. helper phage prep후 top agar로 titer를 하면 plaque이 생기지 않습니다. 그냥 배지(항생제포함된)에서 키우면 cell은 많은데 왜 plaque는 안뜨는지 알수가 없습니다. 문제가 뭔지 잘 모르겠습니다... signal이 높은 5차 phage로 titer를 해도 역시... top agar로 하면 plaque이 뜨지 않지만 그냥 배지(항생제포함된)에서 키우면 titer는 높게 나옵니다.. 어디에 문제가 있는건지.... 조언 부탁드립니다..
  • phage display
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변! 
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변하기
답변 1
  • 답변

    윤철희님의 답변

    2006-06-18
    • 0
    2가지 정도 말씀드리고 싶습니다. 우선 실험하신 과정이 너무 약식으로 나와 있어서 실험 전체를 이해하기는 쉽지 않습니다. 1. 5차까지 panning을 하시게 되면, 일반적으로 insertless phage의 수가 급격히 증가되어집니다. 따라서 일반적으로는 3차정도에서 피크를 보는것이 좋다고 하는데 여기에 정확한 룰이 있는 건 물론 아니고 현재 문제가 여기에서 발생한 것도 아닌것으로 보입니다. 2. 가장 일반적인 문제 중 하나는 E. coli (host)에 문제가 생겼을 경우 plaque 형성이 안되는 경우가 많습니다. 따라서 새로운 호스트 구입을 하셔서 비교실험을 해보시기 바랍니다. 다른 조건들도 물론 plaque 형성에 영향을 미치기는 하지만 제일 먼저 의심가는 곳은 역시 host 입니다. 답글이 조금 늦었지만 좋은 실험 되세요.. >phage display를 하는데요.. >5차 panning 까지 하고 enrichment 되어서 screening을 하려는데 screening이 안됩니다.. 5차 결과에서 시그널이 강해서 당연히 잘될줄 알았는데.. >1.5ml tube에서 300ul culture 을 해도 안되고.. >100ml culture 해서 PEG down을 시켜도 안되고.... >혹시 screening할수있는 또다른 방법이 있나요??? > >그리고 두번째로.. helper phage prep후 top agar로 titer를 하면 plaque이 생기지 않습니다. 그냥 배지(항생제포함된)에서 키우면 cell은 많은데 왜 plaque는 안뜨는지 알수가 없습니다. 문제가 뭔지 잘 모르겠습니다... >signal이 높은 5차 phage로 titer를 해도 역시... >top agar로 하면 plaque이 뜨지 않지만 그냥 배지(항생제포함된)에서 키우면 titer는 높게 나옵니다.. 어디에 문제가 있는건지.... >조언 부탁드립니다..
    답변수정
    2가지 정도 말씀드리고 싶습니다. 우선 실험하신 과정이 너무 약식으로 나와 있어서 실험 전체를 이해하기는 쉽지 않습니다. 1. 5차까지 panning을 하시게 되면, 일반적으로 insertless phage의 수가 급격히 증가되어집니다. 따라서 일반적으로는 3차정도에서 피크를 보는것이 좋다고 하는데 여기에 정확한 룰이 있는 건 물론 아니고 현재 문제가 여기에서 발생한 것도 아닌것으로 보입니다. 2. 가장 일반적인 문제 중 하나는 E. coli (host)에 문제가 생겼을 경우 plaque 형성이 안되는 경우가 많습니다. 따라서 새로운 호스트 구입을 하셔서 비교실험을 해보시기 바랍니다. 다른 조건들도 물론 plaque 형성에 영향을 미치기는 하지만 제일 먼저 의심가는 곳은 역시 host 입니다. 답글이 조금 늦었지만 좋은 실험 되세요.. >phage display를 하는데요.. >5차 panning 까지 하고 enrichment 되어서 screening을 하려는데 screening이 안됩니다.. 5차 결과에서 시그널이 강해서 당연히 잘될줄 알았는데.. >1.5ml tube에서 300ul culture 을 해도 안되고.. >100ml culture 해서 PEG down을 시켜도 안되고.... >혹시 screening할수있는 또다른 방법이 있나요??? > >그리고 두번째로.. helper phage prep후 top agar로 titer를 하면 plaque이 생기지 않습니다. 그냥 배지(항생제포함된)에서 키우면 cell은 많은데 왜 plaque는 안뜨는지 알수가 없습니다. 문제가 뭔지 잘 모르겠습니다... >signal이 높은 5차 phage로 titer를 해도 역시... >top agar로 하면 plaque이 뜨지 않지만 그냥 배지(항생제포함된)에서 키우면 titer는 높게 나옵니다.. 어디에 문제가 있는건지.... >조언 부탁드립니다..
    등록된 댓글이 없습니다.
목록
목록