2006-04-25
org.kosen.entty.User@7d09a611
황래정(skylake2)
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제조합 단백질을 발현시키고 정제시킨후, 이것의 activity를 측정하는 방법을 알고 싶습니다.
어떻한 방법이 있을까요???
E. coli에서 추출한 재조합 단백질을 re-folding한 후의 단백질의 3차 구조가 human에서의 단백질과 일치하는것을,,, 아님 activity가 같다는 것을 증명할수 있는 방법이 있을까요??
부탁드립니다......
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
정철웅님의 답변
2006-04-25- 0
이런식으로 질문하면 답을 하기 곤란합니다. 먼저 어떤 단백질이냐가 문제겠군요. enzyme이라면 kinase? phophatase? protease? 기본 룰은 일정량의 기질을 일정량의 효소가 일정 시간동안 얼마나 변화 시켰나가 activity입니다. 같은 단백질 또는 같은 계열의 단백질로 활성을 측정한 논문이 있을테니 찾아보시기 바랍니다. 폴딩이 되었다고 꼭 활성이 100%일 수는 없습니다. in vivo에서의 folding과 in vitro에서의 folding도 같지 안습니다. in vitro는 어디 까지나 in vivo를 추정하는데 필요하지 완벽하게 같을 필요는 없고요, 알려진 기질을 일정 수준에서 catalysis 시킬 수 있으면 됩니다. human 단백질과 비교하고 싶으시면 분리 또는 구매하셔서 같은 조건에서 실험해보는 수 밖에 없습니다. 조건과 손에 따라서 10~20% 정도 활성이 다르게 나타날수도 있으니 꼭 같이 해야 절대적 비교가 됩니다.