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지식나눔

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glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH)

2006-05-22 org.kosen.entty.User@68b756af 조은재(cej1018)
  • 1
안녕하세요 지난 번에 glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH)측정 때문에 글을 올린 학생입니다. 다름이 아니라 답글로 Kit를 사용하라고 되어 있더군요. 그런데 kit가격(90만원정도)이 만만치 않아서 구입하기가 좀 그런데요. 혹시 kit를 사용하지 않고 GODH를 측정하는 방법이 없는지요? method나 참고 할만한 문헌 좀 부탁드립니다. 좋은 하루 되세요.
  • glycerol-3-phosphate dehydrogenase
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답변 1
  • 답변

    배우철님의 답변

    2006-05-22
    • 0
    다른 시약은 그냥 구하기 쉬운데요.. NADH는 조금 비쌉니다(100mg 92,000원, 500mg 256,000원).. positve control로 효소가 필요하면...Glycerol-3-Phosphate dehydrogenase도 유래(효모, 닭)에 따라서 다르지만 닭근육 기준으로 1000U에 94,000원 정도 합니다.. Reaction: DHAP(Dihydroxyacetone phosphate)+ NADH => Glycerol-3P + NAD+ Enzymatic assay: In 1 ml final volume at 30°C (spectrophotometer cuvettes) Mixture Enzyme 0.5 ml (Hepes 40 mM, pH 7.1, KCl 100 mM; MgSO4 5 mM) NADH 4 mM 0.05ml crude extract 0.05 ml (diluted if necessary in extraction buffer) Water to 0.950 ml Read OD340 nm until stabilization of the line Start by addition of DHAP* 100 mM 0.05ml Follow decrease OD340nm during 5 - 10 min Note: The reaction can be done on the opposite way by replacing NADH by NAD 10 mM and starting the reaction with 50 µl of glycerol-3-P 100 mM The enzyme is highly sensitive to salts and quite unstable in crude extract. Thus, the assay must be done immediately after preparation of the extract DHAP is not very stable at RT. It must be prepared in a buffer at pH 7.O and keep at –20°C in aliquots, which are thaw just for the assay and not reuse afterwards. >안녕하세요 지난 번에 glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH)측정 > >때문에 글을 올린 학생입니다. > >다름이 아니라 답글로 Kit를 사용하라고 되어 있더군요. > >그런데 kit가격(90만원정도)이 만만치 않아서 구입하기가 좀 그런데요. > >혹시 kit를 사용하지 않고 GODH를 측정하는 방법이 없는지요? > >method나 참고 할만한 문헌 좀 부탁드립니다. > >좋은 하루 되세요.
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    다른 시약은 그냥 구하기 쉬운데요.. NADH는 조금 비쌉니다(100mg 92,000원, 500mg 256,000원).. positve control로 효소가 필요하면...Glycerol-3-Phosphate dehydrogenase도 유래(효모, 닭)에 따라서 다르지만 닭근육 기준으로 1000U에 94,000원 정도 합니다.. Reaction: DHAP(Dihydroxyacetone phosphate)+ NADH => Glycerol-3P + NAD+ Enzymatic assay: In 1 ml final volume at 30°C (spectrophotometer cuvettes) Mixture Enzyme 0.5 ml (Hepes 40 mM, pH 7.1, KCl 100 mM; MgSO4 5 mM) NADH 4 mM 0.05ml crude extract 0.05 ml (diluted if necessary in extraction buffer) Water to 0.950 ml Read OD340 nm until stabilization of the line Start by addition of DHAP* 100 mM 0.05ml Follow decrease OD340nm during 5 - 10 min Note: The reaction can be done on the opposite way by replacing NADH by NAD 10 mM and starting the reaction with 50 µl of glycerol-3-P 100 mM The enzyme is highly sensitive to salts and quite unstable in crude extract. Thus, the assay must be done immediately after preparation of the extract DHAP is not very stable at RT. It must be prepared in a buffer at pH 7.O and keep at –20°C in aliquots, which are thaw just for the assay and not reuse afterwards. >안녕하세요 지난 번에 glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH)측정 > >때문에 글을 올린 학생입니다. > >다름이 아니라 답글로 Kit를 사용하라고 되어 있더군요. > >그런데 kit가격(90만원정도)이 만만치 않아서 구입하기가 좀 그런데요. > >혹시 kit를 사용하지 않고 GODH를 측정하는 방법이 없는지요? > >method나 참고 할만한 문헌 좀 부탁드립니다. > >좋은 하루 되세요.
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