지식나눔

2-DE에서요..

2-DE gel 상에서 단백질의 정확한 pH값을 알수있나요? 물론 pH로 한번 분리를 하니까 대강의 pH값은 알수있다고 생각이 되나 정확한 값은 알수가 없을것같은데... 알수있는 방법이 없을까요??
  • 2-DE
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    김도균님의 답변

    안녕하세요? KOSEN팀입니다. 회원님의 정보를 명확하게 수정해 주시기 바랍니다. 어느분야에서 어떤 부분을 연구하시는지 알수가 없습니다. 이를 기반으로 해당 전문가에게 도움 요청 메일이 발송됩니다. 회원정보 수정을 꼭 부탁드립니다. 감사합니다. >2-DE gel 상에서 단백질의 정확한 pH값을 알수있나요? >물론 pH로 한번 분리를 하니까 대강의 pH값은 알수있다고 생각이 되나 정확한 값은 알수가 없을것같은데... 알수있는 방법이 없을까요??
    안녕하세요? KOSEN팀입니다. 회원님의 정보를 명확하게 수정해 주시기 바랍니다. 어느분야에서 어떤 부분을 연구하시는지 알수가 없습니다. 이를 기반으로 해당 전문가에게 도움 요청 메일이 발송됩니다. 회원정보 수정을 꼭 부탁드립니다. 감사합니다. >2-DE gel 상에서 단백질의 정확한 pH값을 알수있나요? >물론 pH로 한번 분리를 하니까 대강의 pH값은 알수있다고 생각이 되나 정확한 값은 알수가 없을것같은데... 알수있는 방법이 없을까요??
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    김홍기님의 답변

    * pH 구별 방법 보통 많이 사용하는 strip은 pH 3-10 pH 3-10 NL pH 4-7 을 주로 많이 쓰시리라 생각됩니다. 1. 적당히 strip의 길이에서 해당 pH를 나누는 경우와 2. 정확한 pH 정보를 알기위해선 2-DE marker를 사용하면 됩니다. 아예 한 strip에 marker를 넣고 IEF와 SDS-PAGE까지 하여 염색을 하면 size marker 처럼 일련의 염색된 protein spots의 분포와 제공된 단백질의 pI와 MW를 통해 구분할 수 있습니다. 3. 사전 실험을 통해 주로 동일한 샘플인 경우 현저한 protein spot을 pH에 따라서 대략 선정하고 이를 MALDI-TOF으로 ID하여 실제 자신의 샘플에서 현저히 발현하는 protein spot의 실제 pI와 MW를 가지고 나머지와 비교할 수 있습니다.
    * pH 구별 방법 보통 많이 사용하는 strip은 pH 3-10 pH 3-10 NL pH 4-7 을 주로 많이 쓰시리라 생각됩니다. 1. 적당히 strip의 길이에서 해당 pH를 나누는 경우와 2. 정확한 pH 정보를 알기위해선 2-DE marker를 사용하면 됩니다. 아예 한 strip에 marker를 넣고 IEF와 SDS-PAGE까지 하여 염색을 하면 size marker 처럼 일련의 염색된 protein spots의 분포와 제공된 단백질의 pI와 MW를 통해 구분할 수 있습니다. 3. 사전 실험을 통해 주로 동일한 샘플인 경우 현저한 protein spot을 pH에 따라서 대략 선정하고 이를 MALDI-TOF으로 ID하여 실제 자신의 샘플에서 현저히 발현하는 protein spot의 실제 pI와 MW를 가지고 나머지와 비교할 수 있습니다.
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