2006-06-07
org.kosen.entty.User@233bc681
배점일(behonest)
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안녕하세요.
제가 요즘 immunostaining을 하고 있습니다.
제가 관찰하는 protein이 microtubule이라 methanol fixation을 많이 사용하고 있습니다. cell line은 NIH3T3입니다. 그런데 methanol fixation과정에서 세포들이 coverslip에서 잘 떨어지는 문제가 있습니다. 이것이 methanol fixation과정에서 자주 일어나는 일인가요?
제가 주로 serum starvation을 이틀정도 한후에 fixation을 하는데, starvation효과로 세포상태가 좋지 않아서 그럴지도 모른다는 생각이 들기는 합니다.
Microtubule staining을 많이 해보신분 있으시면 답변 부탁드리겠습니다.
혹시 세포가 떨어지지 않게 하는 방법이 있을까요? 아니면 다른 staining방법이라도 추천 부탁드리겠습니다.
- microtubule
- methanol
- fixation
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
정철웅님의 답변
2006-06-07- 0
>안녕하세요. > >제가 요즘 immunostaining을 하고 있습니다. > >제가 관찰하는 protein이 microtubule이라 methanol fixation을 많이 사용하고 있습니다. cell line은 NIH3T3입니다. 그런데 methanol fixation과정에서 세포들이 coverslip에서 잘 떨어지는 문제가 있습니다. 이것이 methanol fixation과정에서 자주 일어나는 일인가요? > >제가 주로 serum starvation을 이틀정도 한후에 fixation을 하는데, starvation효과로 세포상태가 좋지 않아서 그럴지도 모른다는 생각이 들기는 합니다. > >Microtubule staining을 많이 해보신분 있으시면 답변 부탁드리겠습니다. >혹시 세포가 떨어지지 않게 하는 방법이 있을까요? 아니면 다른 staining방법이라도 추천 부탁드리겠습니다. 님의 추측이 맞을 것으로 생각됩니다. 어떤 방법으로 실험하시는지 모르겠지만 저의 경우든 세포를 잘 안떨어지게 하기위해서 parafilm 위에 용액을 놓고 그위에 coverslip을 올리는 방식으로 합니다. 참조해 보시기 바랍니다. -
답변
황인식님의 답변
2006-06-08- 0
fixation을 하면 cell이 많이 떨어지는데, 이것은 어쩔수 없는 현상이므로 cell양을 조금더 많이 사용하시는것이 좋을 듯 합니다. 그리고 가끔 cell이 많이 떨어지면 poly-L-lysin이라는 것을 사용하여 cell을 붙여서 하는 방법도 있습니다. 이것은 주로 suspension cell에 사용하는 방법입니다.