2006-06-20
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백유미(undine1213)
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이번에 암세포에 약품을 처리하여 세포독성을 알아보려고 합니다...
MTT보다는 MTS가 더 간단하다고 하여 MTS를 구매했는데요...
어떻게 실험해야 하는 지 잘 모르겠어요...
세포를 96well에 적정한 수만큼 배지와 함께 넣고, 몇 시간 정도 있다가 약품을 처리해야하는지..약품 처리 후, 어느 정도 시간이 흐른 후에 MTS를 처리해햐하는지, 또 MTS는 얼마나 넣어야 하는지...그리고 몇 nm의 파장에서 측정해야하는지...등등 전반적인 프로토콜에 대해서 자세히 설명해 주셨으면 합니다...
- cell culture
- MTT assay
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
배우철님의 답변
2006-06-20- 0
우선... 암세포주에 따라서 증식정도가 다르기 때문에.. 어떤 암종을 선택하시는가가 중요할 것 같네요.. 그래야 실험시 well에 넣는 암세포의 숫자를 정할 수 있습니다..HL-60의 경우에는 5x10(4승)/ml의 농도의 배양액 100 마이크로리터씩 well에 들어가는 경우가 많습니다. 다음 단계로는 약품의 처리 농도 법위를 정하는 것입니다..여기서는 몇번 시행착오를 거치셔야 하는데요.. 많이 이용되는 방식은 우선 고농도의 약품용액을 만든 후에..크게 10배씩 희석을 해서 암세포 저해활성을 대충 파악하신 후에.. 활성이 상당히 보이는 영역의 약품농도에서 세밀하게 다시 시험해야 합니다. 꼭 그런것은 아니지만 약품은 거의 동시에 처리되구요.. 대략 48시간 후에 MTS가 처리됩니다.. MTS 처리에 대해서는 확실하게 말씀드릴 수 있습니다.96well에 각각 들어있는 약품처리된 100 마이크로리터 배양액에 MTS를 20마이크로씩 넣고 1-4시간 37도 인큐베이터에 두신 후에... 490nm영역에서 흡광을 측정하시면 됩니다..물론 실험하시는 분이 약간은 변형해서 실험하실 수는 있습니다.. >이번에 암세포에 약품을 처리하여 세포독성을 알아보려고 합니다... >MTT보다는 MTS가 더 간단하다고 하여 MTS를 구매했는데요... >어떻게 실험해야 하는 지 잘 모르겠어요... >세포를 96well에 적정한 수만큼 배지와 함께 넣고, 몇 시간 정도 있다가 약품을 처리해야하는지..약품 처리 후, 어느 정도 시간이 흐른 후에 MTS를 처리해햐하는지, 또 MTS는 얼마나 넣어야 하는지...그리고 몇 nm의 파장에서 측정해야하는지...등등 전반적인 프로토콜에 대해서 자세히 설명해 주셨으면 합니다... > -
답변
DELETED님의 답변
2006-06-22- 0
MTS assay에 대한 논문을 보내드리니 참고하세요... 참고로 MTS는 MTT와 유사한 tetrazolium 계열의 시약으로써, mitochondria 내의 dehydrogenase에 의해 MTT 또는 MTS가 환원이 되어 formazan을 형성하게 되며, 이렇게 생성된 formazan은 water-insoluble한 형태로 적당한 유기 용매 및 알콜용매를 이용하여 녹인 후 formazan의 생성 정도를 흡광도 측정법을 통해 확인하는 것입니다. 실험중 formazan의 형성 정도는 MTT나 MTS를 처리한 후 추가 배양시 세포가 검은색 또는 보라색으로 변하게 되며 보통 첨가하는 양에 따라 다르지만, 2시간에서 4시간 정도의 배양이면 충분할것입니다.