2006-06-28
org.kosen.entty.User@1af94e4
장지선(ice0708)
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streptavidin bead을 이용하여 DNA binding protein을 isolation하려고 하는데요...
먼저 biotin을 가진 oligo을 합성하여 streptavidin bead에 붙인 다음에 cell lysate을 흘려주어서, DNA binding protein을 isolation하려고 합니다.
후에, MALDI_TOF도 하려면 DNA binding protein만 isolation해아 하는데...
어떻게 해야하나요...
bead을 띠어내는 거면 어떻게 띠어내는 것인지...
아니면 biotin을 bead에서 띠어내는 거라면.. 띠어낸 후에 DNA binding protein만 후에 어떻게 isolation 할 수 있는지 궁금합니다...
알려주세요,,,
급합니다
- streptavidin bead
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답변 1
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답변
전주홍님의 답변
2006-06-29- 0
일반적으로 사용하는 SDS-PAGE sample buffer 넣고 5분 이상 끓이면 avidin-biotin 결합이 끊어집니다. 그런 후 SDS-PAGE 하고 단백질 염색을 한 후 band를 오려내면 isolation이 됩니다. 그 다음은 routine한 단백질 질량 분석과정이 되겠지요... 단 control 실험을 반드시 해서 specific band임을 확인하는 것이 중요하겠죠... 그리고 14 kD의 streptavidin fragment가 나올 수 있는데 이것도 control 실험상에서 specificity를 확인할 수 있습니다. 또한 agarose-bead 보다는 magnetic bead가 훨씬 더 깨끗한 결과가 나올 때가 많습니다. >streptavidin bead을 이용하여 DNA binding protein을 isolation하려고 하는데요... >먼저 biotin을 가진 oligo을 합성하여 streptavidin bead에 붙인 다음에 cell lysate을 흘려주어서, DNA binding protein을 isolation하려고 합니다. >후에, MALDI_TOF도 하려면 DNA binding protein만 isolation해아 하는데... >어떻게 해야하나요... >bead을 띠어내는 거면 어떻게 띠어내는 것인지... >아니면 biotin을 bead에서 띠어내는 거라면.. 띠어낸 후에 DNA binding protein만 후에 어떻게 isolation 할 수 있는지 궁금합니다... >알려주세요,,, >급합니다 >