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지식나눔

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neutrophil로 실험하시는분...^^

2006-06-28 org.kosen.entty.User@58150d46 민경진(satang97)
  • 1
neutrophil 로 실험하고자 하는 학생입니다... 궁금한점은 .. 전..rat의 blood에서 neutrophil을 분리하여서 primary cell로 실험하고자 합니다. 이 분리된 cell(neutrophil이라고 생각되는) 6 well에 seed했는데 붙는cell과 suspension상태로 존재하는 두가지가 존재하는데 어는것이 neutrophil인지 궁금합니다... 많은 조언 부탁드립니다. 이 외에 주의해야할점등...많은 조언 부탁드립니다.. 참..neutrophil cell line으로 많이 사용하는 cell도 알려주세요~~
  • neutrophil
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답변 1
  • 답변

    윤철희님의 답변

    2006-07-05
    • 0
    >neutrophil 로 실험하고자 하는 학생입니다... >궁금한점은 .. >전..rat의 blood에서 neutrophil을 분리하여서 primary cell로 실험하고자 합니다. >이 분리된 cell(neutrophil이라고 생각되는) 6 well에 seed했는데 >붙는cell과 suspension상태로 존재하는 두가지가 존재하는데 어는것이 neutrophil인지 궁금합니다... >많은 조언 부탁드립니다. >이 외에 주의해야할점등...많은 조언 부탁드립니다.. >참..neutrophil cell line으로 많이 사용하는 cell도 알려주세요~~ Neutrophil 실험은 쉽지 않습니다. 우선 density가 적혈구와 비슷한 관계로 순수한 Neutrophil을 얻기가 어렵기 때문입니다. 또 하나의 어려움은 분리 시 많은 양의 혈액이 요구 되어진다는 것입니다. 일반적으로 1. dextran or gelatin sedimentation 또는 2. gradient centrifugation 방법이 사용되어집니다. Percoll과 Histopaque을 혼합 사용하는 방법도 있기는 하나 역시 완벽하지는 못합니다. 최근에는 순수한 Neutrophil이 필요한 경우가 아니라면 flow cytometry를 사용하여 분석을 하는 경향이 늘고 있습니다. 아래의 페이퍼를 보시면 최근 작은 볼륨에서도 Neutrophil 분리를 할 수 있는 방법을 제시하고 있습니다. 그리고, adherent (or attach) 하는 세포는 monocyte, macrophage 계열의 것으로 생각하시면 됩니다. 수지상 세포도 부착이 되기는 하지만 우선 혈액 내 퍼센트가 낮을 뿐더러 plate에 부착하는 정도가 macrophage보다 떨어집니다. Wan, Thomas S K, Tam, Alfred Y C, Yeung, C Y. Neutrophil separation technique for neonates. 1999. British Journal of Biomedical Science 56(3):205-8. De AK, Roach SE, De M, Minielly RC, Laudanski K, Miller-Graziano CL, Bankey PE. Development of a simple method for rapid isolation of polymorphonuclear leukocytes from human blood. J Immunoassay Immunochem. 2005;26(1):35-42. 좋은 실험결과 얻으시기 바랍니다.
    답변수정
    >neutrophil 로 실험하고자 하는 학생입니다... >궁금한점은 .. >전..rat의 blood에서 neutrophil을 분리하여서 primary cell로 실험하고자 합니다. >이 분리된 cell(neutrophil이라고 생각되는) 6 well에 seed했는데 >붙는cell과 suspension상태로 존재하는 두가지가 존재하는데 어는것이 neutrophil인지 궁금합니다... >많은 조언 부탁드립니다. >이 외에 주의해야할점등...많은 조언 부탁드립니다.. >참..neutrophil cell line으로 많이 사용하는 cell도 알려주세요~~ Neutrophil 실험은 쉽지 않습니다. 우선 density가 적혈구와 비슷한 관계로 순수한 Neutrophil을 얻기가 어렵기 때문입니다. 또 하나의 어려움은 분리 시 많은 양의 혈액이 요구 되어진다는 것입니다. 일반적으로 1. dextran or gelatin sedimentation 또는 2. gradient centrifugation 방법이 사용되어집니다. Percoll과 Histopaque을 혼합 사용하는 방법도 있기는 하나 역시 완벽하지는 못합니다. 최근에는 순수한 Neutrophil이 필요한 경우가 아니라면 flow cytometry를 사용하여 분석을 하는 경향이 늘고 있습니다. 아래의 페이퍼를 보시면 최근 작은 볼륨에서도 Neutrophil 분리를 할 수 있는 방법을 제시하고 있습니다. 그리고, adherent (or attach) 하는 세포는 monocyte, macrophage 계열의 것으로 생각하시면 됩니다. 수지상 세포도 부착이 되기는 하지만 우선 혈액 내 퍼센트가 낮을 뿐더러 plate에 부착하는 정도가 macrophage보다 떨어집니다. Wan, Thomas S K, Tam, Alfred Y C, Yeung, C Y. Neutrophil separation technique for neonates. 1999. British Journal of Biomedical Science 56(3):205-8. De AK, Roach SE, De M, Minielly RC, Laudanski K, Miller-Graziano CL, Bankey PE. Development of a simple method for rapid isolation of polymorphonuclear leukocytes from human blood. J Immunoassay Immunochem. 2005;26(1):35-42. 좋은 실험결과 얻으시기 바랍니다.
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