2006-06-29
org.kosen.entty.User@482e1197
김경윤(k2k2y1)
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안녕하세여~~
궁금 한것이 있어서 있어서여~~~
다름이 아니라 transfection을 할려고 하는데
잘 않되는거 같아서 이렇게 글을 올립니다.
제가 cell에 transfection을 하는데 reagent는 fugene 6을 쓰고여
처음에 FBS만 없는 배지에다가 좀 인큐베이션에 넣고여
opti-mem에 반반을 나눠서 DNA랑 reagent을 각각 넣고 30분 정도
나두고 30분이 지나면 둘을 섞어서 셀에다가 넣거든여
여기서 배지는DMEM에서 s/p는 넣고여 FBS는 않넣고여
gfp는 DNA을 넣을때 넣고여
반응을 확인을 하고 patch을 할려고 하는데
힘드네여
우선적으로 transfection이 문제 인거 같아서
이렇게 글을 올립니다.
자세히 나온 protocol을 알고 계시분이나
제가 실험에서 문제가 있는것을 알고계신분은 많은글 부탁드립니다.
- kky
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답변 1
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답변
정철웅님의 답변
2006-06-29- 0
GFP를 transfection 확인 용으로 사용하신 것 맞으시죠? 그렇다면 형광현미경으로 보면 transfection 효율일 보일 텐데요. GFP도 안 보인 다는 것인지, 아니면 GFP는 보이는데 패치로 안나온다는 것인가요? 첫번째 경우라면 GFP도 안 보인 다는 것은 일단 transfection이 안 된 것일 확률이 높습니다. co-transfection의 경우 둘 중 한 디엔에이의 질이 떨어져도 전체적으로 영향을 미칠 수 있습니다. 이럴 때는 다시 뽑아서 써야 합니다. GFP는 보이는데 패치로 안나온다면 일단 시그날이 원하는 데로 안 갈 수도 있고, 타겟 유전자의 발현이 안되었을 수도 있고, GFP와 타겟 유전자의 비가 안 맞아서 일 수 도 있습니다. 현 질문으로는 판단이 안되니 님께서 각각의 경우를 체크 해보시기 바랍니다. >안녕하세여~~ >궁금 한것이 있어서 있어서여~~~ >다름이 아니라 transfection을 할려고 하는데 >잘 않되는거 같아서 이렇게 글을 올립니다. >제가 cell에 transfection을 하는데 reagent는 fugene 6을 쓰고여 >처음에 FBS만 없는 배지에다가 좀 인큐베이션에 넣고여 >opti-mem에 반반을 나눠서 DNA랑 reagent을 각각 넣고 30분 정도 >나두고 30분이 지나면 둘을 섞어서 셀에다가 넣거든여 >여기서 배지는DMEM에서 s/p는 넣고여 FBS는 않넣고여 >gfp는 DNA을 넣을때 넣고여 >반응을 확인을 하고 patch을 할려고 하는데 >힘드네여 >우선적으로 transfection이 문제 인거 같아서 >이렇게 글을 올립니다. >자세히 나온 protocol을 알고 계시분이나 >제가 실험에서 문제가 있는것을 알고계신분은 많은글 부탁드립니다.