2006-07-14
org.kosen.entty.User@19783c44
최순범(beom8649)
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Production of LamB derivatives bearing poly-His segments involved the design of a synthetic linker with two oligonucleotides : 5' GAT CCA AGC GGA CAT CAC CAT CAT CAC CAT TCT GGT 3' and 5'-GAT CAC CAG AAT GGT GAT GAT GGT GAT GTC CGC TTG-3', which encode the amino acid sequence N-Asp Pro 'Ser 'Gly His His His His His His Ser Gly-C. This His linker was designed such that it left a BamHI-overhang at its 5'-end of the coding sequence and one BglII-overhang at its 3'-end. Thus, insertion of the linker in the correct orientation in a BamHI site reconstructs the BamHI sites at the 5' end but not the one at the 3' end.
<출처 : Enhanced metalloadsorption of bacterial cells displaying poly-His peptides, Nature biotechnology, 1996, 14, 1017-1020>
질문1: oligonucleotide를 이용(어떻게?)해서 N-Asp Pro 'Ser 'Gly His His His His His His Ser Gly-C 와 같은 His 링커를 만든것으루 이해하고 있는데요....지문의 첫번째 gene sequence와 원하는 peptide sequence가 일치하네요?? 두번째 gene sequence는 peptide sequence와 일치하지도 않을 뿐더러.....첫번째의 것과 상보적이지도 않고......도대체 이게.....(지금 질문의 요지가 정리가 잘 안되네요;;)
질문2: 지문 중간쯤 보면....디자인된 His링커에는 왼쪽끝에 BamHI이 달려 있다고 하는데요;;;; 왼쪽 끝에 GGATTC가 달려 있지 않은데요???
(저는 화공전공인 사람으로 이쪽분야를 모릅니다. 지금 어쩔수 없이 이쪽 관련된 일을 해야하는 상황이라....도움 청할 분이 없어 여기에 올려봅니다.)
- sequence
- oligonucleotide
- His
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답변 1
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답변
정철웅님의 답변
2006-07-14- 0
일단 답부터 말하면 잘 만들어진 올리고 디자인입니다. 질문 1.에서 첫 번째 올리고와 펩타이드 시퀀스는 일치합니다. 두번째 시퀀스와 상보적이지 않다고 하는데 조금 옮겨 보면 상보적입니다. 아마도 님께서 BamHI-overhang과 BglII-overhang의 의미를 모르셔서 그런 것일 것입니다. BamHI-overhang이라함은 GGATCC가 엔자임에 의해 잘린 GATCC를 달아서 BamHI에 의해서 잘린 다른 DNA와 결합할 수 있게 만든 것입니다. 또한 상보 가닥은 GGATCC중 마지막 C에 대한 상보염기인 G부터 있습니다. 그래야 GATC만이 오버행으로 존재하게 됩니다. BglII 도 마찬가지 원리입니다. 결국 아래 처럼 링커가 형성됩니다. GATC CAAGCGGACATCACCATCATCACCATTCTGGT---- ------GTTCGCCTGTAGTGGTAGTAGTGGTAAGACCA CTAG 이해가 되셨길 빕니다.