2006-07-31
org.kosen.entty.User@7c369da6
문성진(moon98)
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솜씨가 서투른 관계로 fixation하는데 애를 먹고 있습니다.
저보다 실력이 좋으신 분들의 조언을 얻고자 여기에 글을 남깁니다.
저는 drosopila melanogaster를 이용, sperm의 differentiation에 관한 study를 하고 있는데요, immunoflourescence나 in situ hybridization을 하기 위해 testis를 fixation하고자 합니다.
그런데, 여기서 문제가 있어요. 다른게 아니라, whole testis를 fixation을 하게 되면, 아직 confocal이 없는 관계로 정확한 상을 관찰하기가 힘들어서,
testis를 live squash한 뒤에, liquid nitrogen으로 얼리고, 그 후 methanol/aceton fixation 방법으로 fixation을 하려고 하는데요, 정말이지.. (제 손을 짤라버리고 싶을 정도입니다. ㅜㅜ) cell morphology가 엉망이예요.. 무슨 방법이 없을까요?
protocol은 다음과 같이 수행하고 있습니다.
1. dissect testis from young adults fly in testis buffer
2. transfer testis into a 2ul drop of testis buffer on a clean, nonsiliconized 20 X 20-mm cover slip.
3. freeze the slides in liquid nitrogen.
4. remove the coverslips with a razor blade, immediately immerse the slides into methanol at -20℃, and leave for 5 min.
5. transfer the slides into acetone at -20℃ and leave for 1-2 min.
6. transfer the slides into PBS/acetate/triton X-100 sol'n and leave at room temperature for 10 min.
7. wash the slides twice in PBST(5 min. each wash)
저는 이방법대로 하는데요, cell morphology가 정말 표현하기 힘들정도로 이상해요..
혹시나, 굳이 testis가 아니더라도 tissue를 이런 방법으로 fixation 하는 분들 있으시면 이런 방법이 좋다라고 추천좀 해주세요..
정말..미쳐버리겠습니다. OTL
그럼..다들 수고하세요..
감사합니다.
- testis
- squash
- fixation
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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DELETED님의 답변
2009-08-21- 0
>솜씨가 서투른 관계로 fixation하는데 애를 먹고 있습니다.>저보다 실력이 좋으신 분들의 조언을 얻고자 여기에 글을 남깁니다.>>저는 drosopila melanogaster를 이용, sperm의 differentiation에 관한 study를 하고 있는데요, immunoflourescence나 in situ hybridization을 하기 위해 testis를 fixation하고자 합니다.>>그런데, 여기서 문제가 있어요. 다른게 아니라, whole testis를 fixation을 하게 되면, 아직 confocal이 없는 관계로 정확한 상을 관찰하기가 힘들어서, >>testis를 live squash한 뒤에, liquid nitrogen으로 얼리고, 그 후 methanol/aceton fixation 방법으로 fixation을 하려고 하는데요, 정말이지.. (제 손을 짤라버리고 싶을 정도입니다. ㅜㅜ) cell morphology가 엉망이예요.. 무슨 방법이 없을까요?>protocol은 다음과 같이 수행하고 있습니다.>>1. dissect testis from young adults fly in testis buffer>>2. transfer testis into a 2ul drop of testis buffer on a clean, nonsiliconized 20 X 20-mm cover slip. >>3. freeze the slides in liquid nitrogen.>>4. remove the coverslips with a razor blade, immediately immerse the slides into methanol at -20℃, and leave for 5 min.>>5. transfer the slides into acetone at -20℃ and leave for 1-2 min.>>6. transfer the slides into PBS/acetate/triton X-100 sol'n and leave at room temperature for 10 min.>>7. wash the slides twice in PBST(5 min. each wash)>>저는 이방법대로 하는데요, cell morphology가 정말 표현하기 힘들정도로 이상해요..>혹시나, 굳이 testis가 아니더라도 tissue를 이런 방법으로 fixation 하는 분들 있으시면 이런 방법이 좋다라고 추천좀 해주세요..>>정말..미쳐버리겠습니다. OTL>>그럼..다들 수고하세요..>>감사합니다. Re: 잘은 모르겠지만,, 저는 마우스 조직으로 IHC, ISH를 합니다. 저는 paraffin으로 fixing합니다. mophology유지에는 paraffin만한게 없는것 같네요..