2006-08-17
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박다혜(5998967)
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현재 저는 blood에서 RNA를 분리할 때
ficoll을 처리하여 monocyte를 분리한 다음에
trizol kit로 RNA를 분리하는 방법을 사용하고 있습니다.
ficoll을 처리하지 않고 혈액 그 자체를 다운시켜
버피코트라고 하나요? 그 상층액 만으로 분리하면 안되는 것인지..
아님 다른 간단한 방법이 있는지..
좀 가르쳐 주세요
급해요^^
그리고 대략 얼마에 시작해서 얼마 정도의 양을 얻을 수 있는지도 궁금합니다.
- blood
- RNA
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답변 2
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답변
허수학님의 답변
2006-08-18- 0
>현재 저는 blood에서 RNA를 분리할 때 >ficoll을 처리하여 monocyte를 분리한 다음에 >trizol kit로 RNA를 분리하는 방법을 사용하고 있습니다. > >ficoll을 처리하지 않고 혈액 그 자체를 다운시켜 >버피코트라고 하나요? 그 상층액 만으로 분리하면 안되는 것인지.. >아님 다른 간단한 방법이 있는지.. >좀 가르쳐 주세요 >급해요^^ > >그리고 대략 얼마에 시작해서 얼마 정도의 양을 얻을 수 있는지도 궁금합니다. 저는 ficoll을 처리하고 white color layer를 분리해 easy-spin kit(DYNAL,intron, invitrogen 등, rnase inhibitor 포함, bead type과 solution type이 있음)으로 추출하고 있는데 방법도 간단하고 수득률도 trizol로 뽑는것보다 더 많이 나왔습니다. ficoll을 처리하지 않고 혈액 그 자체를 다운시켜 그 상층액 만으로 분리하면 rna quality가 매우 떨어집니다. 귀찮으시더라도 ficoll이나 percoll을 사용하시기 바랍니다. 혈액의 양이 25cc 이상이면 percoll을 사용하여 분리하시면 더 나은 결과를 얻을수 있습니다. dynal제품 기준으로 10cc에서 25-49microgram 이상을 얻을수 있습니다. 독일의 젠트라 제품 추가사항입니다 문의는 웅비메디텍으로 하세요 Product Cat. NO. Whole blood Yield Company Purescript RNA R-5500 10ml 15- 60ug Gentra purification kit R-5000 12 – 49ug Gentra -
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김현주님의 답변
2006-09-13- 0
버피코트층만 분리하면 RBC도 많이 섞이게 되고 또 lose도 많아져서 좀 결과에 영향이 있더라구요 저는 예전에 whole blood를 가지고 sigma HISTOPAQUE-1077 이용했는데 결과가 깨끗하게 잘 나왔어요