2006-08-20
org.kosen.entty.User@4a992e33
이현정(endeavor821)
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안녕하세요,
western을 하다가 결과가 이상해서 물어 볼려고 왔어요
Hela cell에 plasmid를 transfection하여 얻은 cell lysate를 western blot하여 확인하였는데 결과가 좀 이상해요,
transfection한 plasmid의 종류가 다 틀리고 사이즈도 다 틀린데 확인된 밴드의 패턴이 모두 다 똑같아요~~
왜 그렇까요??
결과가 이상해서 다음에 transfection할때는 negative control로 어떤 plasmid도 넣지 않은채 only Hela cell lysate를 다른 샘플과 같이 로딩해서 비교 해볼려고 합니다.
이전에는 buffer를 바꿔 봤더니 밴드가 전체 다 끌려서 나오더니 이번엔 샘플 종류가 틀린데도 불구하고 패턴이 모두 똑같이 나오네요...
정말 왜 이러는 건지.... 아윽~~~~
이런 경험이 있으신 분이 혹... 계신가요??
어떻게 하면 이 문제점을 해결 할 수 있을까요??
그럼 답변 기다리고 있겠습니다.
즐건 휴일 보내세요~~~
- western blot
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
김은민님의 답변
2006-08-23- 0
아마도 antibody의 non-specific band가 아닌가 합니다. 이렇게 되는 경우에는 negative control도 동일 밴드가 나올것입니다!! 안티바디를 바꿔보세요~ *^^* 비싼 안티바디를 바꾸기 쉽지 않겠지만요~ *^^* >안녕하세요, >western을 하다가 결과가 이상해서 물어 볼려고 왔어요 >Hela cell에 plasmid를 transfection하여 얻은 cell lysate를 western blot하여 확인하였는데 결과가 좀 이상해요, >transfection한 plasmid의 종류가 다 틀리고 사이즈도 다 틀린데 확인된 밴드의 패턴이 모두 다 똑같아요~~ >왜 그렇까요?? >결과가 이상해서 다음에 transfection할때는 negative control로 어떤 plasmid도 넣지 않은채 only Hela cell lysate를 다른 샘플과 같이 로딩해서 비교 해볼려고 합니다. >이전에는 buffer를 바꿔 봤더니 밴드가 전체 다 끌려서 나오더니 이번엔 샘플 종류가 틀린데도 불구하고 패턴이 모두 똑같이 나오네요... >정말 왜 이러는 건지.... 아윽~~~~ >이런 경험이 있으신 분이 혹... 계신가요?? >어떻게 하면 이 문제점을 해결 할 수 있을까요?? >그럼 답변 기다리고 있겠습니다. > >즐건 휴일 보내세요~~~