2006-08-21
org.kosen.entty.User@38dbde44
백유미(undine1213)
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western blotting이나 2D-전기영동을 하기위해서 cell line에서 protein을 추출해서 brad ford법으로 농도를 알아봤습니다.. 100mm 짜리 dish에 80% 정도 키워서 얻은 세포 모두에서 겨우 80ug의 protein을 얻었습니다..선배들말론 이것보다 8~10배 정도 많은 양이 있어야 전기영동을 할 수가 있다고 하는데요..
보통 전기영동을 하기 위해 어떤 크기의 dish나 flask에서 키우나요??
그리고, 제 cell line은 HepG2인데요, 이 cell line 에선 원래 단백질양이 이것밖에 되지 않나요??
- HepG2
- protein
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답변 2
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변해미님의 답변
2006-08-22- 0
질문>western blotting이나 2D-전기영동을 하기위해서 cell line에서 protein을 추출해서 brad ford법으로 농도를 알아봤습니다.. 100mm 짜리 dish에 80% 정도 키워서 얻은 세포 모두에서 겨우 80ug의 protein을 얻었습니다..선배들말론 이것보다 8~10배 정도 많은 양이 있어야 전기영동을 할 수가 있다고 하는데요.. >보통 전기영동을 하기 위해 어떤 크기의 dish나 flask에서 키우나요?? >그리고, 제 cell line은 HepG2인데요, 이 cell line 에선 원래 단백질양이 이것밖에 되지 않나요?? > 답변: 제 경험상 100mm 배양접시에 세포가 80%정도 자랐을때, 웨스턴 블랏을 위해 샘플 프렙을 한 경우에도 님보다 훨씬 많은 양의 단백질을 얻었던 것으로 기억합니다. 단백질 샘플 프렙의 경우(핵단백질과 세포질단백질을 구분한다는 등의 특수한 경우는 제외)의 프로토콜은 크게 차이가 없으리가고 보여지는데요. 님 말씀대로 세포주마다의 차이점도 존재하니깐요. 샘플 프렙을 하실때 lysis buffer의 조성을 조금 조절해보시면 어떨까요? 아니면 lysis time같은 것도 바꾸어보시구요. 답변이 많이 미흡했지만, 좋은 해결책을 찾으실수 있을거라 생각합니다. 화이팅! -
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허수학님의 답변
2006-08-22- 0
>western blotting이나 2D-전기영동을 하기위해서 cell line에서 protein을 추출해서 brad ford법으로 농도를 알아봤습니다.. 100mm 짜리 dish에 80% 정도 키워서 얻은 세포 모두에서 겨우 80ug의 protein을 얻었습니다..선배들말론 이것보다 8~10배 정도 많은 양이 있어야 전기영동을 할 수가 있다고 하는데요.. >보통 전기영동을 하기 위해 어떤 크기의 dish나 flask에서 키우나요?? >그리고, 제 cell line은 HepG2인데요, 이 cell line 에선 원래 단백질양이 이것밖에 되지 않나요?? > 저도 지금 HepG2 cell 로 실험하고 있습니다만 cell passage에 따라 조금 차이는 납니다만(40 passage대- 580ug~760ug, 90 passage대- 660ug~900ug) 님은 너무 작은양이라 생각됩니다. 다른cell line 보다 간장세포주의 단백질량이 많더군요. 참 lysis buffer 처리시간도 보통15분-20분인데 전 25-30분정도 처리합니다.. 참고로 대학원생들 트레이닝시 사용했던 lysis buffer 조성법을 파일로 보냅니다. 사진을 직접 찍은거라 쉽게 이해하실줄로 믿습니다. 좋은 결과 얻으시길 바랍니다.. 파일용량이 4메가가 넘어서 그런지 업로드가 안되네요 네이버 멜로 보내드렸어요.. 멜이 되돌아왔네요 주소가 uhndine1213@naver.com 아닌가요...