2006-08-25
org.kosen.entty.User@570b4bd0
신동훈(gabriel78)
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제가 endogeneous한 protein의 binding을 보려고 IP를 하는데...
제가 쓰는 antibody가 rat이어서 control에 rat serum을 넣어주는데 antibody넣어준 것의 같은 위치에 band가 생겨서 지금 참 힘듬니다.
정말로 binding하지 않는다고 하실수도 있겠지만 이것은 yeast two hybrid system으로 그리고 cloning해서 cell에 transfection하여 overexpression해서도 두 protein간의 binding을 확인 하였습니다.
혹시 저랑 비슷한 경험이 있으신 분은 부디 바쁘시더라도 조그마한 tip이라도 가르쳐 주십시요.
부탁드림니다.
- immunoprecipitation
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
조사연님의 답변
2006-08-26- 0
종종 이런 경우가 발생하는데 protein간 interaction이 확실한지를 알아보기 위해선 control 항체를 먼저 lysate와 섞어 overnight로 preclearing을 하고 원하는 항체와 다시 incubation하시면 어느정도 background가 제거될 수 있습니다. 또한 gel running을 할 때 항체만을 running 하여 blotting하여 원하는 위치의 band가 항체로부터 온 것이 아니라는 것도 보여야 합니다. > 제가 endogeneous한 protein의 binding을 보려고 IP를 하는데... > 제가 쓰는 antibody가 rat이어서 control에 rat serum을 넣어주는데 antibody넣어준 것의 같은 위치에 band가 생겨서 지금 참 힘듬니다. > 정말로 binding하지 않는다고 하실수도 있겠지만 이것은 yeast two hybrid system으로 그리고 cloning해서 cell에 transfection하여 overexpression해서도 두 protein간의 binding을 확인 하였습니다. > 혹시 저랑 비슷한 경험이 있으신 분은 부디 바쁘시더라도 조그마한 tip이라도 가르쳐 주십시요. > 부탁드림니다.