2006-08-31
org.kosen.entty.User@472bf59c
권오만(akan21)
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3T3-L1을 키우고 있습니다.
6well에 plating 한 후에 rogiglitazone을 이용하여 분화시키고 있습니다.
그런데 분화가 좀 된것같으면 plate에 붙어있지 못하고 뜨네요...
이 문제를 어떻게 해결하면 좋을까요??
Lysine coating이라도 해야하나요??
3T3-L1 lysine coating 해서 키워도 아무런 문제가 없나요??
혹시 아시는분 계시면 답변 부탁드립니다..^^
그럼 즐거운 하루되세요...
- 3T3-L1
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
허수학님의 답변
2006-08-31- 0
>3T3-L1을 키우고 있습니다. > >6well에 plating 한 후에 rogiglitazone을 이용하여 분화시키고 있습니다. > >그런데 분화가 좀 된것같으면 plate에 붙어있지 못하고 뜨네요... > >이 문제를 어떻게 해결하면 좋을까요?? > >Lysine coating이라도 해야하나요?? > >3T3-L1 lysine coating 해서 키워도 아무런 문제가 없나요?? > >혹시 아시는분 계시면 답변 부탁드립니다..^^ > >그럼 즐거운 하루되세요... 저는 IBMX(0.5mM) 500microliter/50ml Dex.(1μM) 50㎕/50ml Insulin(10㎍/ml) 250㎕/50ml 로 처리하고 있습니다.. 약 10일후에 지방세포로 분화가 되더군요... 아는 분은 추가적으로 sucrose를 1mM로 처리 해주신다고 합니다.. 좋은 결과 있으시길... -
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홍동호님의 답변
2006-09-04- 0
지방세포 분화 측정 세포의 형태 관찰 ① 전지방세포 (preadipocyte)인 3T3-L1 세포는 10-15일간 배양하면 50-70 %이상의 세포가 분화되어 성숙된 지방세포로 변한다. ② 이때 세포의 형태 (morphology)를 관찰하여 세포 모양이 둥글어지고 세포질 (cytoplasm)이 지방으로 꽉 찬 정도를 광학현미경으로 관찰한다. ※ 평가: 가장 간편하고 경제적인 방법이나 정확한 정량적 데이터가 아니다. 지방세포 수 측정 세포배양판 (plate)에 붙어있는 세포를 수습하여 현미경을 이용하여 헤마사이토미터 (hemacytometer)로 세포수를 측정한다. ※ 평가: 간편하고 경제적인 방법. 데이터 분석에서 기본적인 것만 얻을 수 있다. Oil-Red-O 염색법 지방세포로 분화된 세포내의 지방을 염색하여 분화정도를 측정한다. ① 세포를 7 % 포름알데하이드 (formaldehyde)가 포함된 인산완충염용액으로 1시간 동안 고정시킨 후 PBS 로 세척한다. ② 세포를 1 % Oil-Red-O가 있는 99 % 이소프로판올 (isopropylalcohol) 액으로 10분 간 염색한다. ③ 세포질내 붉은색 과립이 있는 세포를 분화된 지방세포로 간주하고, 광학현미경으 로 관찰하면서 헤마사이토미터(hemacytometer)로 세포수를 측정한다. ④ 염색된 Oil-Red-O를 이소프로판올로 녹여내어 510 nm에서 흡광도를 측정하여 지방 세포의 분화정도를 측정한다. ※ 평가: 정확한 수치적 데이터를 얻을 수 있고 세포내 지방 함량 데이터를 동시에 얻을 수 있으므로 많이 이용한다. 참고문헌: Green H, Kehinde O, Sublines of mouse 3T3 cells that accumulate lipid. Cell, 1: 113-116, 1974 -
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배명호님의 답변
2006-09-04- 0
>3T3-L1을 키우고 있습니다. > >6well에 plating 한 후에 rogiglitazone을 이용하여 분화시키고 있습니다. > >그런데 분화가 좀 된것같으면 plate에 붙어있지 못하고 뜨네요... > >이 문제를 어떻게 해결하면 좋을까요?? > >Lysine coating이라도 해야하나요?? > >3T3-L1 lysine coating 해서 키워도 아무런 문제가 없나요?? > >혹시 아시는분 계시면 답변 부탁드립니다..^^ > >그럼 즐거운 하루되세요... 3T3-L1세포의 분화가 잘되게 하기 위해서는 저밀도 배양을 해야 합니다. 즉, 화합물을 처리하기 전이라도 100% confluency까지 키우진 마시고, 70%이하의 저밀도 배양을 해야 분화능이 유지됩니다. 세포가 뜨는 것도 혹시 세포수와 관련이 있지 않은지 모르겠습니다. 이점 참고하시기 바랍니다. 참고로 제가 실험할 때의 분화배지 조성은, 1 ug/ml human insulin, 1 uM dexamethasone, 0.5 mM IBMX을 사용했습니다. 그럼..