2006-09-25
org.kosen.entty.User@22fe36fb
이장한(hanymir)
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3 ug의 혹은 더 적은 양의 protein을 학교실험실수준에서 가능한 정량할수있는 방법을 알고싶습니다.
혹은 spec.으로도 가능한지 알고 싶습니다.
- protein
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답변 2
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답변
홍동호님의 답변
2006-09-25- 0
>3 ug의 혹은 더 적은 양의 protein을 학교실험실수준에서 가능한 정량할수있는 방법을 알고싶습니다. > >혹은 spec.으로도 가능한지 알고 싶습니다. > > 뷰렛 시험 (biuret test) 두개 이상의 펩티드 결합을 가지고 있는 화합물들은 알칼리성 용액에서 묽은 황산구리 로 처리하면 자주색을 띠는 물질을 생성한다. 색깔은 구리원자와 두 개의 펩티드 사슬 에서 오는 네 개의 질소원자들 사이에서 배위화합물이 형성됨으로써 생기는 것으로 생 각되고 있다. 뷰렛 시험은 모든 단백질에 대해서 재현성이 꽤 좋으나 비교적 많은 양(1내지 20mg)의 단백질을 정량하는 데 쓰이는 방법이다. Lowry 시험(Folin-Ciocalteau ) Lowry등이 고안한 이 단백질 정량분석법은 용액에 있는 단백질뿐 아니라 건조된 시료 에도 이용될 수 있다. 특히 이 정량방법은 5ug/ml정도의 단백질 양을 정량할 수 있는 대단히 민감한 방법이어서 널리 쓰이고 있다. 이 Lowry 방법에서 사용하는 Folin-Ciocalteau시약에 의한 발색은 뷰렛 시험에서와 마찬가지로 단백질과 알칼리성 구리와의 반응과 포스포몰리브덴산-포스포텅스텐산 염들이 단백질에 있는 티로신과 트 립토판 들에 의한 환원반응으로 생긴다. 이 두 아미노산의 함량은 단백질의 종류에 따 라서 상당히 다르므로 1mg의 단백질에 대한 색의 세기가 일정하지가 않다. 표준곡선을 결정하는 데 사용한 단백질이 나타내는 색의 세기와 다를 수 있다. 그럼에도 불구하고 이 방법은 단백질을 정제하는 과정에 있어서 단백질의 함량변화를 측정하는 데는 매우 유용한 방법이다. 분광학적 정량법 단백질에 있는 티로신, 페닐알라닌 및 트립토판 잔기들은 각각 275nm와 280nm의 자외 선을 흡수한다. 많은 단백질들에 있어서의 이 아미노산들의 합친 수준은 거의 일정하 므로 단백질의 농도는 280nm에서의 흡광도와 비례하게 된다. 물론 예외가 있기는 하지 마 순수한 단백질의 경우 단백질의 농도가 1mg/ml이고 자외선이 통과하는 경로가 1cm 일 때 280nm에서의 흡광도는 1.0이다. 따라서 대부분의 순수한 단백질의 농도는 280nm 에서의 흡광도를 측장함으로써 신속히 결정할 수 있다. 이 방법은 정량하는 데 시간이 적게 들 뿐만 아니라 정량하고 난 후의 단백질을 환전히 회수하여 재이용할 수 있는 이점이 있다. 유감스럽게도 자연물들에는 280nm에서 흡광을 나타내는 그밖의 화합물들이 많이 있다. 특히 핵산은 260nm에서 최대 흡수를 가지고 있지만 280nm에서도 흡광도가 상당히 크 다. 그러 A280/A260을 알면 280nm에서의 핵산의 흡광에 대한 보정을 할 수 있다. -
답변
김성원님의 답변
2006-09-27- 0
Micro BCA assay 매뉴얼입니다. 많이들 이용하는 방법인데 아직 안써보셨나 보네요. UV spectrophotometer나 ELISA reader기가 있으면 됩니다. >3 ug의 혹은 더 적은 양의 protein을 학교실험실수준에서 가능한 정량할수있는 방법을 알고싶습니다. > >혹은 spec.으로도 가능한지 알고 싶습니다. > >