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글루코사민 분석법에 대해 문의드립니다.

글루코사민을 HPLC로 함량 분석을 하고자 하는데.. 분석법을 아신다면 소개좀 해주시면 감사하겠습니다. 지금 하고있는 방법은 C18 컬럼과 UV detector로 검출할려고하는데 검출이 되지 않습니다. 방법좀 알려주심 감사하겠습니다.
  • glucosamine
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    배우철님의 답변

    HPLC 제조사인 alltech의 ppt 자료입니다.. http://www.alltechweb.com/productinfo/technical/posters/pp108.ppt#256,1,An Alternative High Efficiency HPLC Assay For Glucosamine >글루코사민을 HPLC로 함량 분석을 하고자 하는데.. >분석법을 아신다면 소개좀 해주시면 감사하겠습니다. >지금 하고있는 방법은 C18 컬럼과 UV detector로 검출할려고하는데 검출이 되지 않습니다. >방법좀 알려주심 감사하겠습니다.
    HPLC 제조사인 alltech의 ppt 자료입니다.. http://www.alltechweb.com/productinfo/technical/posters/pp108.ppt#256,1,An Alternative High Efficiency HPLC Assay For Glucosamine >글루코사민을 HPLC로 함량 분석을 하고자 하는데.. >분석법을 아신다면 소개좀 해주시면 감사하겠습니다. >지금 하고있는 방법은 C18 컬럼과 UV detector로 검출할려고하는데 검출이 되지 않습니다. >방법좀 알려주심 감사하겠습니다.
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    이종석님의 답변

    >글루코사민을 HPLC로 함량 분석을 하고자 하는데.. >분석법을 아신다면 소개좀 해주시면 감사하겠습니다. >지금 하고있는 방법은 C18 컬럼과 UV detector로 검출할려고하는데 검출이 되지 않습니다. >방법좀 알려주심 감사하겠습니다. 사용 하시고있는 방법은 두가지 문제점이 있습니다. 첫째, C18 컬럼은 RP컬럼이므로 글루코사민이 흡착되지 않습니다. 즉, solvent피크에 같이 섞여 나오게 되어 원하는 크로마토그램을 얻을수 없습니다. => C18 이 아닌 당분석용 컬럼을 사용하셔야 할것입니다. 일반적으로 C18보다 고가입니다. C18 컬럼을 사용할려면 글로코사민이 좀더 비극성 성질을 갖도록 derivatization시켜야 합니다. 둘째, UV 검출기의 일반적인 range(200-600nm)에서 글루코사민이 흡광하지 않아서 샘플내에 글루코사민이 있다 하더라도 검출되지 않습니다. => ELSD, RI, Mass같은 detector로 확인 하셔야 합니다. 당분석용 컬럼을 장착한 HPLC-ELSD 나 LC-MS 시스템으로 분석하는게 적절할것 같습니다. 특히, LC-MS는 정확한 분자량과 구조정보까지 알수 있습니다.
    >글루코사민을 HPLC로 함량 분석을 하고자 하는데.. >분석법을 아신다면 소개좀 해주시면 감사하겠습니다. >지금 하고있는 방법은 C18 컬럼과 UV detector로 검출할려고하는데 검출이 되지 않습니다. >방법좀 알려주심 감사하겠습니다. 사용 하시고있는 방법은 두가지 문제점이 있습니다. 첫째, C18 컬럼은 RP컬럼이므로 글루코사민이 흡착되지 않습니다. 즉, solvent피크에 같이 섞여 나오게 되어 원하는 크로마토그램을 얻을수 없습니다. => C18 이 아닌 당분석용 컬럼을 사용하셔야 할것입니다. 일반적으로 C18보다 고가입니다. C18 컬럼을 사용할려면 글로코사민이 좀더 비극성 성질을 갖도록 derivatization시켜야 합니다. 둘째, UV 검출기의 일반적인 range(200-600nm)에서 글루코사민이 흡광하지 않아서 샘플내에 글루코사민이 있다 하더라도 검출되지 않습니다. => ELSD, RI, Mass같은 detector로 확인 하셔야 합니다. 당분석용 컬럼을 장착한 HPLC-ELSD 나 LC-MS 시스템으로 분석하는게 적절할것 같습니다. 특히, LC-MS는 정확한 분자량과 구조정보까지 알수 있습니다.
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