2006-10-25
org.kosen.entty.User@66aaf32b
오순진(ohorangi)
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펩타이드나 단백질 내에 있는 두 개의 -SH기를 disulfide 기 (-S-S-)로 만들 수 있는 용액의 조건을 아시는 분 답변 부탁드립니다.
가능한 조건을 모두 가르쳐 주시면 감사하겠습니다.
- disulfide
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
홍동호님의 답변
2006-10-25- 0
>펩타이드나 단백질 내에 있는 두 개의 -SH기를 disulfide 기 (-S-S-)로 만들 수 있는 용액의 조건을 아시는 분 답변 부탁드립니다. >가능한 조건을 모두 가르쳐 주시면 감사하겠습니다. 다음의 중간 구절에 있습니다. SDS폴리아크릴 아마이드 젤 전기영동 이 방법은 특히 단백질이 단의체인지 아니면 소중합체 인지를 결정할 때와 소중합체를 구 성하는 소단위체들의 수와 크기를 결정할 때 유용하게 사용한다. 이 지지체는 다른 젤에 비해 기질이 단단하기 때문에 변성조건에서 단백질을 전기영동하기에 적합하다. 반성조건에서 전기영동을 하는 이유는 첫째, 세포막등과 같은 불영성의 생체 물질을 변성 유도제나 유화제로 용해시켜 분석할 수 있고 둘째, 여러 가지 성분으로 이루어져 있는 복합체를 해체시켜 분석할 수 있고 셋째, SDS와 같은 강한 이온성 유화제를 사용함으로써 단백질의 분자량을 측정성하는 소단위체들의 수와 크기를 결정할 때 유용하게 사용된다.SDS-PAGE는 중성PH에서 SDS와 베타-MERCAPTOETHANOL이 존재하는 조건하에서 수행된다. SDS는 단백질과 결합하여 단백질의 규칙적인 삼차구조를 파괴하여 불규칙하고 무작정한 코일 구조를 가지게 한다. SDS와 단백질과의 이러한 작용은 단백질의 사슬 내에 있는 DISULFIDE 결합 또는 사슬들 사이의 DISULFIDE 결합을 환원시키는 베타-MERCAPTOETHANOL에 의해 촉진된다. 특히 SDS는 강한 음전하를 띄고 있으며 단백질과 일정한 비율로 결합하는 성질을 가지고 있어 SDS복합체는 질량에 대한 전하의 비가 일정하게 된다. SDS와 결합한 단백질은 변성이 됨과 동시에 많은 음전하를 띄게 되므로 단백질 자체의 전하는 무시된 체 단백질의 크기에 의해서만 젤 내에서의 분리가 된다. 따라서 이미 분자량을 알고 있는 표준단백질과 함께 전기영동을 하면 단백질의 분자량을 측정할 수 있다. -
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이승규님의 답변
2006-10-27- 0
>펩타이드나 단백질 내에 있는 두 개의 -SH기를 disulfide 기 (-S-S-)로 만들 수 있는 용액의 조건을 아시는 분 답변 부탁드립니다. >가능한 조건을 모두 가르쳐 주시면 감사하겠습니다. 펩타이드 cyclization 1. 산화 환원제 (GSH, GSSG) 또는 (CSH, CSSC)등을 사용하고 농도는 샘플을 약 20 microM하여 sample:GSH:GSSG = 1:100:10으로 합니다. 2. denaturing buffer Urea, GdnHCL --> 펩타이드가 물에 잘 녹지 않을 때, 0.5M~2M 정도까지 사용합니다. 3. buffer Tris buffer, NH4OAc 등으로 buffering하고 pH는 7.8~8.0 4. salting out peptide에 charge가 많을 경우, (SO4)2-나 NaCl을 첨가하기도 합니다. 5.air oxidation과 4도에서의 반응이 좋습니다.