2006-11-27
org.kosen.entty.User@5144ec31
변해미(aimolio623)
- 1
안녕하세요
Q-RT-PCR에 관한 자료를 보다가 기초가 부족하여 이렇게 코센에
도움을 요청하게 되었습니다.
특정 유전자를 레트로바이러스벡터에 트랜스펙션 시킨후
그 벡터를 다시 세포에 트랜스덕션하고자 합니다.
이때, 유전자 전달이 잘 되었는지를 Q-RT-PCR로 확인하고자 합니다.
일단 컨트롤은 2개를 사용하였습니다.
첫번째 컨트롤은 플라스미드 자체이고
두번째 컨트롤은 플라스미드가 발현되었을 경우 나타나는
단백이 있는 세포입니다.
첫번째 컨트롤은 동일한 세포 수당 10배씩 플라스미드 수를 늘린
샘플6개와, 두번째 컨트롤은 특정단백을 발현하는 세포의 비율에 따라( 100프로, 50프로 등) 5개를 준비하였습니다.
Q-RT-PCR을 이용하여 각각의 Ct value를 얻었고,
이것으로 standard graph를 얻으려고 합니다.
이때, 각각 샘플에 따라서 b-actin 또한 Q-RT-PCR을 돌려야 하는지요?
그리고 이렇게 두 종류의 standard graph에 따라서 내가 원하는 유전자가 잘 전달되었는지, 유전자 전달 효율을 확인하는데 무리가 없는지요.
( 아마도 플라스미드 copy number와 특정 단백을 발현하는 세포의 비율로
결과가 얻어질 듯 합니다.)
질문 자체가 많이 애매한지도 모르겠습니다만,
고수님들의 답변 부탁드리겠씁니다.
- Q-RT-PCR
- transduction
- Ct value
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변!
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 1
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답변
김남철님의 답변
2006-11-28- 0
plasmid가 있다면 그 것이 control 이죠.. 정확한 양 또는 카피넘버를 이미 알고 있기 때문에 그 플라스미드를 사용해 PCR을 하고 값을 사용해서 샘플에서의 양, 카피넘버를 알 수 있죠... 근데 이 말이 잘 이해가 안되는군요... “동일한 세포 수당 10배씩 플라스미드 수를 늘린“ 잉... 주소가 유한이네요... 저는 2004년 퇴직... -_-; >안녕하세요 > >Q-RT-PCR에 관한 자료를 보다가 기초가 부족하여 이렇게 코센에 >도움을 요청하게 되었습니다. > >특정 유전자를 레트로바이러스벡터에 트랜스펙션 시킨후 >그 벡터를 다시 세포에 트랜스덕션하고자 합니다. >이때, 유전자 전달이 잘 되었는지를 Q-RT-PCR로 확인하고자 합니다. > >일단 컨트롤은 2개를 사용하였습니다. >첫번째 컨트롤은 플라스미드 자체이고 >두번째 컨트롤은 플라스미드가 발현되었을 경우 나타나는 >단백이 있는 세포입니다. > >첫번째 컨트롤은 동일한 세포 수당 10배씩 플라스미드 수를 늘린 >샘플6개와, 두번째 컨트롤은 특정단백을 발현하는 세포의 비율에 따라( 100프로, 50프로 등) 5개를 준비하였습니다. > >Q-RT-PCR을 이용하여 각각의 Ct value를 얻었고, >이것으로 standard graph를 얻으려고 합니다. > >이때, 각각 샘플에 따라서 b-actin 또한 Q-RT-PCR을 돌려야 하는지요? > >그리고 이렇게 두 종류의 standard graph에 따라서 내가 원하는 유전자가 잘 전달되었는지, 유전자 전달 효율을 확인하는데 무리가 없는지요. >( 아마도 플라스미드 copy number와 특정 단백을 발현하는 세포의 비율로 >결과가 얻어질 듯 합니다.) > >질문 자체가 많이 애매한지도 모르겠습니다만, > >고수님들의 답변 부탁드리겠씁니다.