2006-12-05
org.kosen.entty.User@5ed2fdab
강지영(blue30901)
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저는 세포의 노화의 여부를 판별하기위해 노화의 marker인 전 SA-beta-gal staining 을 하고 있는데요... stiaing의 효율이 매우 낮습니다...
즉 잘 staining이 되지 않는데요..
특별한 과정이 있는 실험도 아니고 protocol도 대부분 같은 실험인데..
왜 잘 안되는지 모르겠습니다..
그리고 staining을 위해 fixiation할 때 foraldehyde와 함께 glutaraldehyde를 넣는 protocol이 있던데..
이것을 넣으면 foraldehyde로만 fixiation할 때 와 차이가 많이나나요?
궁금합니다...
- staining
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답변 1
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답변
전주홍님의 답변
2006-12-06- 0
일단 제가 먼저 질문을 던지겠습니다. Human primary fibroblast cell을 사용하시는지요? (population doubling time이 어느 된 것인지요?) Accelerated senescence model로 실험을 진행하시는지요? 아니면 replicative senescence인지요...? morphological change는 확실하게 senescence를 반영할 수 있는지요? Foraldehyde fixation만 하더라도 큰 문제는 없지만 fixation time이 너무 길면 chemical modification에 의한 enzyme inactivation이 일어날 수도 있습니다. 그냥 세포를 고정시키는 것 말고는 큰 의미가 있는 건 아닙니다. 사용하신 staining buffer의 pH는 acidic한지요... 일반 리포터로 사용하는 b-gal과는 buffer pH를 달리해야 하는데요... 조금 더 discussion이 필요할 것 같네요... 좋은 결과 있으세요... >저는 세포의 노화의 여부를 판별하기위해 노화의 marker인 전 SA-beta-gal staining 을 하고 있는데요... stiaing의 효율이 매우 낮습니다... >즉 잘 staining이 되지 않는데요.. >특별한 과정이 있는 실험도 아니고 protocol도 대부분 같은 실험인데.. >왜 잘 안되는지 모르겠습니다.. >그리고 staining을 위해 fixiation할 때 foraldehyde와 함께 glutaraldehyde를 넣는 protocol이 있던데.. >이것을 넣으면 foraldehyde로만 fixiation할 때 와 차이가 많이나나요? >궁금합니다... >