2006-12-15
org.kosen.entty.User@68379293
송인경(songink)
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western을 하려고 하는데 protein에 DTT가 든 4X sample buffer만 넣고 boiling하지말고 바로 page를 내리라고 하네요.
이렇게하면 band가 잘 분리되나요?
만약 이렇게 하는 경우에는 뭔 이유가 있나요?
- western blot
- protein
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답변 1
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답변
최기섭님의 답변
2006-12-20- 0
>western을 하려고 하는데 protein에 DTT가 든 4X sample buffer만 넣고 boiling하지말고 바로 page를 내리라고 하네요. >이렇게하면 band가 잘 분리되나요? > >만약 이렇게 하는 경우에는 뭔 이유가 있나요? Western이라는게 antigen과 antibody의 결합을 보는것이므로 antigen을 최대한 원형 그대로 보존해야 epitope이 살아있게 됩니다. 따라서, boiling을 하지 말라고 하는 것은 protein의 열에의한 변성을 최소화 하겠다는 의미가 있습니다. DTT는 일반적으로 생각하듯이 reducing agent로 첨가하여 disulfide bond의 reduction하려는 의미가 있구요. western이 잘 되는 antigen의 경우에는 SDS-PAGE에 Boiling을 해도 one band로 잘 보이지만 heat labile antigen의 경우에는 PAGE를 할때 부터 변성에 주의해야 합니다. 그리고, band를 잘 분리하는 것 보다는 변성을 시키지 않고자 하는데 그 목적이 있습니다. boiling을 적당히 하는 것이 band 분리에는 더 유리하지요.