2007-02-06
org.kosen.entty.User@b2f4971
최혜인(poppet82)
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제가 원하는 단백질과 p53의 binding을 알아보기 위해 IP를 했는데
p53과 heavy chain의 사이즈가 비슷해서 분리하기가 쉽지 않은데요
젤 퍼센트를 낮추는 방법을 사용해 봤는데 별 효과가 없네요..
혹시 좋은 방법 알고계신분 있으면 알려주세요~^^
- p53
- IP
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답변 3
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답변
왕진희님의 답변
2007-02-07- 0
저도 p53과 다른 단백질간의 interaction을 보기 위해 IP를 했었습니다. 지금 질문은 주신분처럼 그런 문제가 있었는데... 제가 그때 사용했던 방법은.. p53으로 IP를 한후 결합하는 단백질로 WESTERN을 해보는거였습니다. 결합 단백질로 ip를 하고 p53으로 western을 하게되면 늘 heavy chain이랑 같은 사이즈의 밴드가 문제가 되었기때문에 말이죠... 큰 도움은 못되지만 참고가 되었으면 합니다. 좋은 결과 있으시길 바랍니다.. -
답변
윤철희님의 답변
2007-02-07- 0
>제가 원하는 단백질과 p53의 binding을 알아보기 위해 IP를 했는데 > p53과 heavy chain의 사이즈가 비슷해서 분리하기가 쉽지 않은데요 >젤 퍼센트를 낮추는 방법을 사용해 봤는데 별 효과가 없네요.. >혹시 좋은 방법 알고계신분 있으면 알려주세요~^^ Pierce에 보시면.. 컬럼을 사용하는 방법이나 또는 elution 할때 항원만 떨어지도록 하는 방법을 사용하시면 heavy chain과 겹치지 않아서 선명한 밴드를 얻을 수 있습니다. 위 사이트 참고하시고 .. 좋은 실험 되세요.. -
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오정수님의 답변
2007-02-08- 0
>제가 원하는 단백질과 p53의 binding을 알아보기 위해 IP를 했는데 > p53과 heavy chain의 사이즈가 비슷해서 분리하기가 쉽지 않은데요 >젤 퍼센트를 낮추는 방법을 사용해 봤는데 별 효과가 없네요.. >혹시 좋은 방법 알고계신분 있으면 알려주세요~^^ 항체를 바꿔보세요.. 예를들면, 마우스 p53항체로 IP를 했다면 Western blot은 rabbit으로 하는거죠..반대로 해도 되고요.. 도움이 되셨는지.. 그럼 즐~ 실험..