2007-02-13
org.kosen.entty.User@2fa71b7a
양경미(yakm)
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V5/His taqqed 된 full length anti-apoptosis gene과 c-term gene(taqqed)을 trsnsfection하여 western해본 결과 full length에서는 detection이 되지 않고 c-term gene을 발현한 부분에서만 detection이 되는데 왜 그런일이 일어날까요? transfection은 lipofectamin2000을 사용했습니다.
사실, 특징으로는 c-term부분에 ubiquitin ligase domain이 있는데,c-term발현부분에서 detectin되는 것을 보면 이것과는 관련이 없는것으로 생각되는데, 뭔가에 의해서 N-term이 공격을 받는지는 모르겠습니다.
full length gene을 transfection할경우 비슷한 경험이 있으신분 조언부탁합니다.
- Transfection
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
정철웅님의 답변
2007-02-16- 0
- full length와 partial 자체의 DNA size 차이로 인한 transfection 효율 부터 차이가 있을 수 있습니다. transfection 자체를 검증 해 보시기 바랍니다. - full length N-term 쪽을 sequencing 해서 mutation으로 인한 종결condon이 생기지 않았는지 확인 해 보시기 바랍니다. - Tag이 어느 부위에 달려있고 detection은 어떤 항체로 하셨나요? 2 종류 이상의 다른 항체를 사용하여 검증 해보시기 바랍니다. - 단백질 sequence상의 post-translational modification 정보를 검토 해보시기 바랍니다. >V5/His taqqed 된 full length anti-apoptosis gene과 c-term gene(taqqed)을 trsnsfection하여 western해본 결과 full length에서는 detection이 되지 않고 c-term gene을 발현한 부분에서만 detection이 되는데 왜 그런일이 일어날까요? transfection은 lipofectamin2000을 사용했습니다. >사실, 특징으로는 c-term부분에 ubiquitin ligase domain이 있는데,c-term발현부분에서 detectin되는 것을 보면 이것과는 관련이 없는것으로 생각되는데, 뭔가에 의해서 N-term이 공격을 받는지는 모르겠습니다. > >full length gene을 transfection할경우 비슷한 경험이 있으신분 조언부탁합니다. > > > >