KOSEN 한인과학기술자네트워크

>안녕하세요. >딱히 물어보아도 아는 사람이 없어서 이렇게 여기에 도움을 요청합니다. >제 실험에서 kit를 쓰는데 이 프로토콜에서는 assay 반응 후 “Read the fluorescent label at 340nm excitation and emission at 390nm and at 470nm.“이렇게 하라고 쓰여 있습니다. >그래서 저희 과에 있는 plate reader를 사용해서 측정할려고 했는데 위의 파장을 선택할수가 없게 되어 있습니다. 3가지 정도의 파장만을 선택하게 되어 있습니다.예를 들면 360/40, 528/20, 620/** 이런식으로 되어 있어서 선택의 여지가 없습니다. > >님들께서 써 보셨을지도 모르니깐 plate reader의 정확한 이름을 알려드리면 >“SynergyTM 2 Multi-Detection Microplate Reader“ 입니다. 그리고 BioTek 회사꺼구요. > >이 회사 홈페이지에 들어가서 확인해보면 파장이 200-700nm라고 써 있습니다. 혹시 이 파장에 맞는 filter를 사야하는 것인가요? 아님 제가 이 기계 사용법을 잘 몰라서 못 찾는걸까요? > >님들 어떻게 해야 하는지 알려주세요. >어려움 있을때마다 도움주시는 분들께 감사합니다. >그럼 오늘하루도 행복하게 보내세요. > 질문자분이 사용하신 dye의 경우엔, 340nm에서 excitation이 되고 390nm와 470nm에서 dual emission이 되는 걸로 보이네요. 이런 상황에서 형광을 측정하기 위해서는 340nm를 포함하는 excitation filter를 이용해서 excitation을 시키시고, 390nm 또는 470nm를 포함하는 emission filter를 이용해서 emission fluorescence를 측정해야 합니다. excitation or emission filter에서 표시되는 값은 360/40 이런 식으로 되어 있는데, 앞의 숫자는 그 필터에 통과할 수 있는 빛의 파장의 중간 값을 의미하고, 뒤의 숫자는 그 필터에 통과할 수 있는 빛의 파장의 범위를 의미합니다. 즉, 360/40이라고 되어 있는 필터는 360nm를 중심으로 최대 통과 파장의 범위가 40nm라는 의미입니다. 이는 340nm-380nm까지의 빛이 그 필터를 통과할 수 있음을 의미합니다. 그러므로, 이러한 사실을 바탕으로 emission filter 중에서 390nm 또는 470nm를 통과 시킬 수 있는 필터를 선택해야만 함을 의미합니다. 만약에 이러한 파장의 빛을 통과시킬 수 있는 필터가 없다면, 새로 필터를 구입해야합니다. 그리고, “이 회사 홈페이지에 들어가서 확인해보면 파장이 200-700nm라고 써 있습니다“라고 하셨는데, 이건 그 제품이 200-700nm 범위의 필터를 사용할 수 있는 제품이라는 뜻이지, 그 제품이 그 범위의 빛을 모두 선택적으로 통과시킬 수 있다는 뜻은 아닙니다. 그리고, 한마디를 더 하자면, 그 제품을 구입한 회사에 전화를 해서 이러한 필터가 필요한데, 이 필터가 현재 사용하고자 하는 형광 물질에 적합한지를 확인하고자 하니 혹시 제품이 있으면 테스트를 해볼 수 없을까하고 부탁을 해보세요.. 제 경우엔 이렇게 먼저 테스트를 해 본후에 계속 사용할 거 같아서 나중에 구입을 하기도 했습니다. 도움이 되셨길 바라며, 궁금한 사항은 추가로 질문을 올리도록 하세요..