2007-03-15
org.kosen.entty.User@4e260049
김주희(jhhappy)
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helper phage를 prep해서 titration을 하였습니다.
top agar를 이용하여 plaque을 볼려고 하는데.. plaque이 생기질 않네요... kanimycin이 들어있는 배지에 깔면 cell이 엄청 많이 존재하는데.. plaque은 생기질 않네요... 어디에서 문제가 생긴건지....
helper phage를 XL1 blue에 infection시킨후 15min 37℃에 두고...
0.7% agar or agarose 를 충분히 식힌후 cell에 infection시킨 helper phage를 넣고 LB plate에 부었습니다...
하도 안되서 다른 실험실에서 plaque이 생기는 helper를 가지고 했는데도.... plaque이 생기질 않네요...
혹시 cell이 너무 많아서 plaque이 생기질않나해서.... 8,10,12,14,16,18 승까지 희석해서 깔았는데도..... colony로는 엄청나게 많이 뜨는데..... 정말로 답답하네요...
이런 경험이 계시는분이 계시면 좀 가르쳐주세요....
- helper phage
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답변 1
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답변
김동욱님의 답변
2007-04-12- 0
>helper phage를 prep해서 titration을 하였습니다. >top agar를 이용하여 plaque을 볼려고 하는데.. plaque이 생기질 않네요... kanimycin이 들어있는 배지에 깔면 cell이 엄청 많이 존재하는데.. plaque은 생기질 않네요... 어디에서 문제가 생긴건지.... > >helper phage를 XL1 blue에 infection시킨후 15min 37℃에 두고... >0.7% agar or agarose 를 충분히 식힌후 cell에 infection시킨 helper phage를 넣고 LB plate에 부었습니다... >하도 안되서 다른 실험실에서 plaque이 생기는 helper를 가지고 했는데도.... plaque이 생기질 않네요... >혹시 cell이 너무 많아서 plaque이 생기질않나해서.... 8,10,12,14,16,18 승까지 희석해서 깔았는데도..... colony로는 엄청나게 많이 뜨는데..... 정말로 답답하네요... >이런 경험이 계시는분이 계시면 좀 가르쳐주세요.... 사용한 XL1-Blue strain을 신뢰할만한 실험실에서 다시 얻어서 해보길 권합니다. 간혹 이 strain을 랩에서 대충다루면 episome [F'proAB lacIqZDM15 Tn10 (Tetr)]에 문제 생길수 있습니다. 이런겨우 phage가 세포밖의F'을 인식못하여 못들어갑니다. XL1-Blue strain: recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 relA1 lac [F'proAB lacIqZDM15 Tn10 (Tetr)]