2007-03-16
org.kosen.entty.User@74aec22c
배형우(genetic99)
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안녕하세요.
저는 Lecithin Cholesterol acyltransferase(LCAT)gene을 cloning해서 activity가 있는지를 확인하고 있습니다. LCAT gene은 Human liver cDNA로 PCR을 수행해서 얻었습니다. 그리고 pCMV-script vector를 사용했습니다. Transfection시 이용한 cell line은 human lung cell line인 CRL5803을 사용했습니다. Transfection을 한후 geneticin(항생제)으로 선별을 해서 stable cell line을 얻었습니다. 그리고 LCAT antidody를 이용해서 western blotting을 수행한 결과 62-65KD의 진한 band를 확인하였습니다. 이 결과로 봐서는 LCAT protein이 잘 만들어 진것 같습니다. 그런데 assay 방법을 통해서 확인시 product를 얻지 못했습니다. 제가 정확한 assay 방법을 알지 못하고 있는듯 합니다. 이 LCAT protein은 cholesterol과 Lecithin을 이용해서 cholesteryl fatty acid ester를 만듭니다.
혹시 LCAT에 관한 실험을 해보신분 계시면 assay 방법 좀 알려주시면 대단히 고맙겠습니다. 제가 할수 있는한 많은 방법을 사용해 봤지만 아직 정확한 방법을 찾지 못했습니다.
- ja
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답변 1
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답변
박재봉님의 답변
2007-03-17- 0
>안녕하세요. > >저는 Lecithin Cholesterol acyltransferase(LCAT)gene을 cloning해서 activity가 있는지를 확인하고 있습니다. LCAT gene은 Human liver cDNA로 PCR을 수행해서 얻었습니다. 그리고 pCMV-script vector를 사용했습니다. Transfection시 이용한 cell line은 human lung cell line인 CRL5803을 사용했습니다. Transfection을 한후 geneticin(항생제)으로 선별을 해서 stable cell line을 얻었습니다. 그리고 LCAT antidody를 이용해서 western blotting을 수행한 결과 62-65KD의 진한 band를 확인하였습니다. 이 결과로 봐서는 LCAT protein이 잘 만들어 진것 같습니다. 그런데 assay 방법을 통해서 확인시 product를 얻지 못했습니다. 제가 정확한 assay 방법을 알지 못하고 있는듯 합니다. 이 LCAT protein은 cholesterol과 Lecithin을 이용해서 cholesteryl fatty acid ester를 만듭니다. > >혹시 LCAT에 관한 실험을 해보신분 계시면 assay 방법 좀 알려주시면 대단히 고맙겠습니다. 제가 할수 있는한 많은 방법을 사용해 봤지만 아직 정확한 방법을 찾지 못했습니다. 논문을 찾아 올립니다.