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지식나눔

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yeast two hybrid실험중인데..

2007-04-03 org.kosen.entty.User@392d055d 오지선(kamangoo)
  • 1
X-gal 플레이트 만들때 넣는다는 raffinose가 뭔지 궁금합니다.. 원래 그냥 galactose만 넣어서 activation시켰는데.. 꼭 넣어야 하는 이유가 있나요?
  • yeast
  • X-gal
  • raffinose
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답변 1
  • 답변

    김동욱님의 답변

    2007-04-12
    • 0
    >X-gal 플레이트 만들때 넣는다는 raffinose가 뭔지 궁금합니다.. >원래 그냥 galactose만 넣어서 activation시켰는데.. >꼭 넣어야 하는 이유가 있나요? 답변: Galactose activation 시 Raffinose의 역활. 통상적으로 yeast (S.cerevisiae)는 carbon source를 이용할때 좋아하는 순서가 있습니다. Carbon source로 glucose, fructose, sucrose, galactose, maltose, raffinose등이 사용될수 있는데, Yeast가 잘자라는 정도는 Glucose, Fructose > Raffinose > Galactose, Maltose 순입니다. Raffinose사용시 Glucose에 비해 약 30%정도로 yeast가 잘라며, Galatose system을 건드리지 않습니다. 이런걸 non-repressing, non-inducing ('neutral') sugar라고합니다. 이런 'neutral' sugar에서 키우다가 Galactose를 첨가해주면 Gal promoter가 좀더 잘 induction됩니다. 유사하게 Raffinose/Galatose mixed 배지를 쓰기도하는데 효과는 비슷합니다. 아래 논문을 찾아 읽어보세요. ===================== 'Foreign gene expression in yeast' (Yeast v8 .pp423-488) Romanos et al “Galactose-inductions can be carried out in one of three ways: (1) by growing the culture on a non-repressing, non-inducing ('neutral') sugar, when very rapid induction follows addition of galactose; (2) by growing the culture in glucose medium but removing the glucose by centrifugation and washing the cells before resuspension in galactose medium (this leads to a lag of 3 to 5 h in induction); and (3) by growing the cells in medium containing both glucose and galactose, when glucose is preferentially metabolized before galactose-induction can occur.
    답변수정
    >X-gal 플레이트 만들때 넣는다는 raffinose가 뭔지 궁금합니다.. >원래 그냥 galactose만 넣어서 activation시켰는데.. >꼭 넣어야 하는 이유가 있나요? 답변: Galactose activation 시 Raffinose의 역활. 통상적으로 yeast (S.cerevisiae)는 carbon source를 이용할때 좋아하는 순서가 있습니다. Carbon source로 glucose, fructose, sucrose, galactose, maltose, raffinose등이 사용될수 있는데, Yeast가 잘자라는 정도는 Glucose, Fructose > Raffinose > Galactose, Maltose 순입니다. Raffinose사용시 Glucose에 비해 약 30%정도로 yeast가 잘라며, Galatose system을 건드리지 않습니다. 이런걸 non-repressing, non-inducing ('neutral') sugar라고합니다. 이런 'neutral' sugar에서 키우다가 Galactose를 첨가해주면 Gal promoter가 좀더 잘 induction됩니다. 유사하게 Raffinose/Galatose mixed 배지를 쓰기도하는데 효과는 비슷합니다. 아래 논문을 찾아 읽어보세요. ===================== 'Foreign gene expression in yeast' (Yeast v8 .pp423-488) Romanos et al “Galactose-inductions can be carried out in one of three ways: (1) by growing the culture on a non-repressing, non-inducing ('neutral') sugar, when very rapid induction follows addition of galactose; (2) by growing the culture in glucose medium but removing the glucose by centrifugation and washing the cells before resuspension in galactose medium (this leads to a lag of 3 to 5 h in induction); and (3) by growing the cells in medium containing both glucose and galactose, when glucose is preferentially metabolized before galactose-induction can occur.
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