2007-05-18
org.kosen.entty.User@4d73e1e7
김중재(jjkaos)
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2D-Gel 을 silver staining 하면 단백질 농도가 높은 spot 의 경우 가운데가 투명하게 염색이 됩니다.
단지 spot 짤라 maldi 분석하거나 할 때는 문제가 되지 않는데,
sofrware 에서 spot intensity 를 계산하거나 spot 갯수를 예상하거나 할 때는
spot 으로 인식하지 않거나 intensity 가 굉장히 낮게 나와 문제가 됩니다.
어떻게 해결 할 수 있나요?
제가 사용하는 silver staining 방법은 다음과 같습니다.
1. Fixation 30 min
Ethanol 200 ml
Acetic acid 50 ml
DW 500 ml
2. Sensitizing 30 min
Ethanol 75 ml
Sodium thiosulfate (5%) 0.5g
Sodium acetate 17g
DW 250 ml
3. Washing - DW
4. Silver reaction 20 min
Silver nitrate 0.625g
Formaldehyde (37%) 100 ul
DW 250 ml
5. Washing - DW
6. Developing
Sodium carbonate 6.25g
Formaldehyde (37%) 100 ul
DW 250 ml
7. Stop
EDTA 3.65g
DW 250 ml
- 2D-PAGE
- Silver staining
- spot
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답변 1
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답변
김성훈님의 답변
2007-05-25- 0
단백질의 농도가 높아서 그런거라.... 디벨롭핑 시간을 짧게 하거나 단백질 양을 줄이는 수 밖엔 없을 것 같네요. 그럼...상대적으로 적은 양의 단백질은 거의 보이지 않을 수도 있지만... 여러번 반복해서 최적 시간을 찾아야 할 것 같네요.