2007-05-19
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임채진(kwcl)
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안녕하세요.
growth factor 발현 증가를 보기위해 RT-PCR을 수행했습니다.
IGF-1, HGF, VEGF에 대해 진행하면서 GAPDH를 control로 사용했습니다.
그런데.. HGF나 VEGF는 변화가 없거나, VEGF는 처리 시 오히려 signal이 감소했었는데요.. IGF-1과 GAPDH의 signal이 증가했습니다.
제가 처리한 물질이 처리된 세포의 proliferation을 증가시키는 것으로 예상되어지고 있는 상태인지라, 이때의 성장인자 발현 증가 여부가 중요하거든요. 하지만 GAPDH의 signal이 증가되어 어떻게 해석해야할 지 난감합니다.
선생님들의 고언을 청합니다.
- GAPDH
- IGF-1
- RT-PCR
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답변 3
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답변
임채진님의 답변
2007-05-19- 0
RT PCR 결과입니다. -
답변
윤철희님의 답변
2007-05-19- 0
제 생각에는 GAPDH가 control이므로 증가가 되어졌다고 보는 건 control이라는 정의를 벗어나는 것 같습니다.. 따라서 처리농도가 증가되면서 GAPDH가 증가되어진 것이 아니라 다른 요인 즉, cDNA 양이 더 많이 첨가되어서 나타나는 현상등, 이 아닐까 싶네요.. 다시한번 시도하셔서 GAPDH가 일정하도록 mRNA --> cDNA를 동일하게 사용하셔서 각 처리구를 분석하시면 될 듯 싶습니다.. KGF 처리에서 감소하는 현상이 나타날 수 있을 것 같습니다.. 좋은 실험되세요.. >안녕하세요. >growth factor 발현 증가를 보기위해 RT-PCR을 수행했습니다. >IGF-1, HGF, VEGF에 대해 진행하면서 GAPDH를 control로 사용했습니다. >그런데.. HGF나 VEGF는 변화가 없거나, VEGF는 처리 시 오히려 signal이 감소했었는데요.. IGF-1과 GAPDH의 signal이 증가했습니다. >제가 처리한 물질이 처리된 세포의 proliferation을 증가시키는 것으로 예상되어지고 있는 상태인지라, 이때의 성장인자 발현 증가 여부가 중요하거든요. 하지만 GAPDH의 signal이 증가되어 어떻게 해석해야할 지 난감합니다. >선생님들의 고언을 청합니다. -
답변
오진미님의 답변
2007-05-22- 0
답변 달아주신분의 말씀이 맞는것 같습니다 정량을 다시 하셔서 RT를 재수행하시는것이 좋겠습니다 우선 마음이 급하시다면 확인차 image program을 이용해서 normalization해보시는것도 좋을것 같습니다 control인 GAPDH가 증가한다고 하셨는데, band를 normalization할 경우 감소하는것으로 보이는 VEGF가 증가하거나 변화가 없을 수도 있습니다 저도 비슷한 경우가 많았거든요 제가 사용하는 image program은 'Image J' 라는 프로그램입니다 다 알고계시는 사항인데 제가 너무 앞서나간거같아 부끄럽습니다 고생이 많으십니다~ 수고하세요 >안녕하세요. >growth factor 발현 증가를 보기위해 RT-PCR을 수행했습니다. >IGF-1, HGF, VEGF에 대해 진행하면서 GAPDH를 control로 사용했습니다. >그런데.. HGF나 VEGF는 변화가 없거나, VEGF는 처리 시 오히려 signal이 감소했었는데요.. IGF-1과 GAPDH의 signal이 증가했습니다. >제가 처리한 물질이 처리된 세포의 proliferation을 증가시키는 것으로 예상되어지고 있는 상태인지라, 이때의 성장인자 발현 증가 여부가 중요하거든요. 하지만 GAPDH의 signal이 증가되어 어떻게 해석해야할 지 난감합니다. >선생님들의 고언을 청합니다.